Clonagem do gene cyclodipeptide synthases de Nocardiopsis prasina em vetor de expressão eucariótica para avaliação de sua atividade antitumoral

• Processo: 24/02802-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Rodrigo Esaki Tamura
• Beneficiário: Laura Maria Pinto Dias
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas (ICAQF). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus Diadema. Diadema , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/15619-2 - Desenvolvimento de sistema adenoviral de alta capacidade expressando genes com atividade antitumoral, AP.JP
• Assunto(s): Neoplasias Clonagem Genes bacterianos Terapia genética Técnicas de transferência de genes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | clonagem | genes bacterianos | terapia genica | transferencia genica | Biologia Molecular

Resumo

A molécula majoritária encontrada no sobrenadante das bactérias Bacillus paralicheniforms, que apresentou atividade antitumoral em células de cancer de próstata, foi o Ciclo (Phe-Tyr). Em células renais caninas (MDCK- Madin-Darby canine kidney) ciclo (Phe-tyr) apresentou citotoxicidade que mata 50% das células (CC50) em concentrações de 90 µM (Zhang et al. 2018). Em células de carcinoma cervical (HeLa), colon carcinoma (HT-29) e de carcinoma de mama (MCF-7) ciclo Phe-tyr) também apresentou atividade citotóxica (Kilian et al. 2005). Os diciclopeptideos como o ciclo (Phe-tyr) são encontrados em sua maioria (90%) em bactérias e apresentam uma grande gama de atividades biológicas (Giessen et al. 2014). Essas moléculas são em geral formadas pela ação de cyclodipeptide synthases (CDPs) (Gondry et al. 2009). Uma mutação na cyclodipeptide synthase de Nocardiopsis prasina (CDPS-Np) favorece a síntese de ciclo (phe-tyr) invés de ciclo (tyr-tyr) e, portanto, é um gene interessante para ser utilizado como gene com atividade antitumoral (Brockmeyer et al. 2017). Assim pretendemos otimizar o gene CDPS-Np para o códon usage humano e clonar esse gene em vetor de expressão eucariótico pcDNA3 fusionado a um peptídeo flag. Em seguida será avaliada a capacidade da superexpressão desse gene em induzir a produção de ciclo(phe-tyr) por ressonância magnética nuclear e capacidade de reduzir a viabilidade de células de cancer de próstata PC3 e DU145.