A interação das vesículas extracelulares com o complexo cumulus-oócitos durante a pré-maturação e maturação in vitro pode influenciar na competência oocitária e regulação epigenética?

• Processo: 23/16602-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Situação: Interrompido
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Cláudia Lima Verde Leal
• Beneficiário: Priscila Helena dos Santos
• Instituição Sede: Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos (FZEA). Universidade de São Paulo (USP). Pirassununga , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 25/09646-8 - Sistema de Cultivo de Pre-maturação: a associação de dbcAMP e sildenafil como moduladores do bloqueio meiótico para melhorar a maturação oocitária e produção embrionária., BE.EP.PD
• Assunto(s): Técnicas de maturação in vitro de oócitos Biotecnologia da reprodução
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bloqueio meiótico | maturação oocitária | Nicho folicular | regulação epigenética | Biotecnologia da Reprodução

Resumo

Os mecanismos epigenéticos que tornam o oócito totipotente e competente ao desenvolvimento estão no centro de muitas questões não respondidas na biologia. A melhor compreensão desses fenômenos básicos oferece uma oportunidade para desenvolver novas biotecnologias com benefícios para humanos e animais. A presente proposta é parte integrante do projeto temático São Paulo Excellence Chair (SPEC-FAPESP) "Maturação epigenética do oócito e totipotência - potencial do oócito e sua relação com o nicho folicular ovariano". Este estudo almeja investigar o bloqueio meiótico temporário e reversível (pré-MIV), antes de maturação in vitro (MIV), como forma de prover tempo adicional ao complexo cumulus-oócito (CCO) para adquirir características epigenéticas e moleculares, que melhorem a competência oocitária. A suplementação de vesículas extracelulares de fluido folicular (fVEs), constituintes do nicho (ambiente) folicular, nas etapas de cultivo, também será investigada. Para tanto, na etapa 1 (PMIV/MIV), experimento 1, os oócitos serão submetidos à PMIV seguida de MIV e, antes e após cada etapa, serão avaliados quanto a: 1) maturação nuclear, 2) padrões epigenéticos (DNA e histonas), expressão de genes imprinted e 4) desenvolvimento embrionário por ativação partenogenética. Na etapa 2 (fVEs), experimento 1, será avaliada a adição de fVEs na PMIV/MIV sobre: 1) maturação nuclear e qualidade oocitária (atividade mitocondrial, teor de lipídios, quantidade de mtDNA, transcritos de metabolismo lipídico e função mitocondrial e níveis de EROs e GSH) e 2) expressão de genes antioxidantes e de expansão nas células do cumulus (CC). No experimento 2, será determinado o efeito sobre: 1) transcriptoma (RNAseq de oócitos e CC) e 2) padrões epigenéticos nos oócitos. No experimento 3, será avaliado o efeito sobre competência para o desenvolvimento após fertilização e cultivo in vitro e os embriões avaliados quanto a: 1) qualidade (número total de células e apoptose), 2) padrões epigenéticos e 3) expressão de genes de regulação epigenética. Espera-se obter novo conhecimento que auxilie na compreensão da regulação epigenética em oócitos e sua relação com fVE, fornecendo bases para melhorias das condições de produção in vitro de embriões.