Avaliação da interferência da proteína osteopontina na modulação da resposta inflamatória celular após a infecção in vitro pelo vírus Chikungunya e seu potencial terapêutico

• Processo: 24/05524-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Benedito Antônio Lopes da Fonseca
• Beneficiário: Danillo Lucas Alves Espósito
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/26119-0 - Vírus emergentes e reemergentes: biologia, patogênese e prospecção, AP.TEM
• Assunto(s): Arbovirus Febre de Chikungunya CRISPR-Cas9 Edição de RNA Inflamação Virologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Arbovírus | Chikungunya | CRISPR-Cas9 | edição gênica | Inflamação | Virologia

Resumo

Foi demonstrado em estudo prévio do nosso grupo que o gene SPP1 foi positivamente modulado in vitro após infecção por MAYV, que é um vírus diferente de outro vírus artritogênicos da mesma família, pois induz resposta inflamatória mais atenuada. Isso pode resultar da modulação diferenciada de SPP1. O gene SPP1 codifica osteopontina, uma proteína que tem diversas funções, como remodelamento ósseo, angiogênese, migração de tumores, além de estar relacionada com reparo de processos inflamatórios. Em contrapartida, osteopontina parece regular a resposta de células T, com inibição da citocina antiinflamatória IL-10 e aumento da resposta Th1 pró- inflamatória. Camundongos com deficiência de osteopontina têm aumento de IL-10 e diminuição de IL-12 e interferon gama. A alta expressão de osteopontina após infecção por CHIKV pode contribuir para processos inflamatórios, com modulação da resposta de células Th. O objetivo deste projeto é avaliar a influência da osteopontina na modulação da resposta inflamatória induzida por CHIKV, com a hipótese de que a sua expressão leva a um comprometimento do balanço entre a resposta inflamatória e anti-inflamatória, o que pode acentuar os sintomas apresentados pelos pacientes. Para estudar a influência da osteopontina na resposta inflamatória por CHIKV, serão utilizados silenciamento de expressão gênica e posterior análise de expressão de citocinas pró e anti- inflamatórias diante da infecção pelo vírus. Inicialmente, células de linhagem monocítica humana (U937) serão utilizadas para deleção de região codificadora do gene SPP1 pela técnica de CRISPR- Cas9, com RNA guia específico para este gene. Além disso, será feito silenciamento por RNAi em U937 e PBMC para o transcrito que codifica a proteína osteopontina. Em células infectadas será avaliado o perfil de expressão de citocinas por Luminex, além de expressão gênica por RT-qPCR, de citocinas pró-inflamatórias e reguladoras.