Cromatografia e técnicas analíticas para anticorpos monoclonais (estrutura e função)

• Processo: 24/13757-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
• Data de Término da vigência: 08 de janeiro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Ana Maria Moro
• Beneficiário: Flávia Mayumi Morais Adachi
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/11436-3 - EMU: Beacon-optofluídica para triagem de células únicas em alto rendimento, AP.INFRA7.TECIN
• Assunto(s): Análise estrutural Anticorpos monoclonais Cromatografia Epitopos Ressonância de plasmônio de superfície Bioquímica de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Analise Estrutural | anticorpo monoclonal | Binning | Cromatografia | Epitopos | ressonância plasmônica de superfície | Bioquímica de proteínas

Resumo

A partir de sobrenadantes de cultivo de mAbs expressos em células de mamíferos, haverá cromatografia em resina de proteína A para purificação inicial do anticorpo. Quando necessário seguirá por cromatografias de troca iônica para polimento. Haverá cromatografia para purificação de antígenos (quando expressos no laboratório). Os eluatos das cromatografias serão acondicionados no tampão preferencial para cada caso (por diálise ou centrifugação em resinas sólidas). A estrutura dos anticorpos será avaliada inicialmente por eletroforese. WB e ELISA são técnicas complementares para avaliação da ligação em antígeno desnaturado por eletroforese ou nativo e sensibilizado em placa, respectivamente. Em casos específicos haverá a ligação dos mAbs em alvos celulares por imunofluorescência e citometria de fluxo. A ligação ao alvo será avaliada também por ressonância plasmônica de superfície. Os mAbs serão objeto de estudo de cinética de afinidade. A atividade funcional será avaliada caso a caso dependendo do alvo e da função específica que se espera para o anticorpo. O conjunto de tecnologias analíticas vai permitir a seleção dos melhores mAbs para cada alvo (vírus ou toxina), que serão encaminhados para o desenvolvimento de linhagens celulares estáveis, com potencial para escalonamento.