Pequenas moléculas e miRNAs como biomarcadores de criotolerância e fertilidade no sêmen de cachaços.

• Processo: 24/10894-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2024
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: André Furugen Cesar de Andrade
• Beneficiário: Leriana Garcia Reis
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Congelabilidade Fertilidade Metabolômica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Congelabilidade | diluidores | fertilidade | Holding time | Metabolomica | Biotecnologia do Sêmen e Andrologia

Resumo

O uso da metabolômica e da avaliação do perfil de micro-RNAs para o estudo da andrologia e função espermática em suínos ainda é muito escasso. Em recentes projetos finalizados por nosso grupo, teve-se a grata surpresa de verificar que o tipo e por vezes a quantidade de pequenas moléculas, dentre elas os micro-RNAs variam entre ejaculados de boa capacidade de congelação e ejaculados de baixa capacidade de suportar o processo de criopreservação (diferentes criotolerâncias). Estas mudanças podem ser monitoradas nos metabólitos e nos micro-RNAs encontrados na célula espermática. Na presente proposta pretendemos avaliar de forma direcionada e avaliando-se qualitativamente e quantitativamente os oito (8) metabólitos e os micro-RNAs que diferiram nos espermatozoides pertencentes aos ejaculados com maior e menor criotolerância no artigo de Torres et al., 2022 e de Pedrosa et al., 2021 (Proc. FAPESP 2016/24690-4), respectivamente. Adicionalmente, será verificado se a presença destas pequenas moléculas são mantidas constantes quando é obtido diversos ejaculados de um mesmo cachaço. Para a realização desse experimento, serão utilizados quantos cachaços forem necessários para obter os ejaculados com diferença de criotolerância. Estes terão seus ejaculados coletados processados e parte enviados (1/3) refrigerados (17º C) ao laboratório no qual acontecerá a congelação e parte enviados (2/3) para as granjas nas quais serão utilizados nas inseminações artificiais homospérmicas. Alíquotas de espermatozoides destes ejaculados serão coletadas, processadas e armazenadas para futura análise da metabolômica e dos micro-RNAs. Após a descongelação do sêmen serão realizadas as análises computadorizadas da motilidade e a avaliação simultânea da integridade da membrana plasmática e acrossomal por citometria de fluxo. Desta maneira, serão formados dois grupos de ejaculados: 1) os que apresentarem alta criotolerância: motilidade total > 50% e espermatozoides com integridade de membrana plasmática e acrossomal > 40%; 2) os que apresentarem baixa criotolerância com motilidade total < 35% e espermatozoides com integridade da membrana plasmática e acrossomal < 30%. Serão selecionados 10 animais representativos para compor os grupos. As amostras destes 20 animais selecionados (que foram armazenadas previamente) serão então submetidas as análises de metabolômica e dos micro-RNAs (serão avaliados 5 ejaculados destes 20 animais, n=100). Será então requisitado o histórico de fertilidade e do número de leitões nascidos dos ejaculados avaliados para a análise de correlação entre estas variáveis e os metabólitos e os micro-RNAs. Ao fim do projeto pretende-se provar as seguintes hipóteses:1) É possível identificar um padrão de pequenas moléculas e de micro-RNAs que são identificadas em ejaculados com alta e baixa criotolerância; 2) Os oito (8) metabólitos e três (3) micro-RNAs previamente selecionados, permitem a classificação dos ejaculados em alta e baixa criotolerância; 3) A quantidade dos oito (8) metabólitos e três (3) micro-RNAs, previamente selecionados, é mantida de forma constante entre diferentes ejaculados de um mesmo cachaço; 4) A criotolerância é positivamente correlacionada com a fertilidade e o número de leitões nascidos (totais e vivos).