Purificação da L-ASNase II via processos cromatográficos com líquidos iônicos suportados e em solução

• Processo: 24/17115-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2025
• Área de conhecimento: Engenharias - Engenharia Biomédica - Bioengenharia
• Pesquisador responsável: Valéria de Carvalho Santos Ebinuma
• Beneficiário: Enzo Corvello
• Supervisor: Mara Guadalupe Freire Martins
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Universidade de Aveiro (UA), Portugal
• Vinculado à bolsa: 23/14606-0 - Desenvolvimento de uma plataforma de purificação de L-asparaginase II de Aliivibrio fischeri produzida em Bacillus subtilis, BP.MS
• Assunto(s): Biofármacos Cromatografia Líquidos iônicos Purificação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biofármaco | Cromatografia | L-ASNase II | líquidos iônicos | purificação | Purificação de biomoléculas

Resumo

A L-asparaginase (L-ASNase) é uma enzima capaz de catalisar a hidrólise da asparagina, o que a torna um biofármaco de extrema importância para a indústria farmacêutica, sendo empregada na terapia da leucemia linfoblástica aguda. No entanto, novas fontes de produção dessa enzima são requeridas por conta do desenvolvimento de hipersensibilidade das atuais formulações, sendo necessário o desenvolvimento de novos biofármacos menos imunogênicos e com elevada atividade. Por conta de sua produção ocorrer via microrganismos, são necessárias diversas etapas de purificação para a obtenção da proteína com elevada pureza, requerimento essencial para sua aplicação. Para isso, existem métodos de baixa resolução que realizam a purificação inicial da molécula de interesse ao remover alguns dos contaminantes presentes no meio, como é feito através da precipitação, em que estratégias podem ser combinadas para concentrar a proteína alvo removendo as moléculas que não são de interesse. Já os métodos de alta resolução visam obter a molécula alvo com elevada pureza, sendo que os variados métodos cromatográficos podem ser empregados para essa finalidade por conta de sua elevada especificidade. No entanto, a purificação é a maior responsável pelo custo final dos produtos, já que envolve o uso de colunas caras e, geralmente, há perda da molécula alvo durante o processo. Assim, fica evidente a importância de se produzir a L-ASNase com elevada pureza aliado a processos que diminuam o custo do produto final. Almejando a melhora dessa etapa, visando a diminuição dos custos e aumento da pureza, esse projeto avaliará o uso de líquidos iônicos suportados como matrizes da separação cromatográfica de forma que seja aumentada a especificidade para a molécula de interesse, podendo ser utilizados junto a matrizes de sílica ou polimérica, mantendo a sua seletividade e diminuindo o volume necessário para uso. Outra alternativa a ser avaliada é a cromatografia de partição centrífuga, que se aproveita da diferença de partição da molécula entre duas fases miscíveis submetidas a uma força centrífuga, evitando o uso de colunas que aumentam o custo da operação.