Geração de Células CAR-NK Direcionadas ao CD19 Derivadas de Fontes Primárias Usando CRISPR/AAV

• Processo: 24/22467-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Virginia Picanço e Castro
• Beneficiário: Camilly Melo Garcia Ferreira
• Supervisor: Dean Anthony Lee
• Instituição Sede: Hemocentro de Ribeirão Preto. Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da USP (HCMRP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Nationwide Children's Hospital, Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 24/01305-4 - Desenvolvimento de estratégias integradas para a purificação de partículas lentivirais, BP.MS
• Assunto(s): Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Terapia baseada em transplante de células e tecidos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aav | Células feeder | Células NK primárias | Crispr | receptor de antígeno quimérico | terapia celular | Terapia Celular

Resumo

As células Natural Killer (NK) são uma alternativa promissora à terapia com receptor antígeno quimérico (CAR) baseada em células CAR-T. Diferentemente das células CAR-T, as células CAR-NK mantêm sua capacidade intrínseca de reconhecer células tumorais por meio de seus receptores. Além disso, as células NK possuem requisitos de compatibilidade HLA menos restritivos e não apresentam potencial para causar doença do enxerto contra o hospedeiro (GVHD). Isso torna as células CAR-NK prontas para uso terapêutico alogênico ("off-the-shelf"). As terapias CAR alogênicas representam uma solução para limitações inerentes aos processos autólogos. Dada a relevância dessa abordagem terapêutica e a maior segurança associada às fontes primárias de células NK em comparação com linhas celulares, como a NK-92, é necessário melhorar a aplicabilidade das células NK de fonte primária, alcançando níveis mais altos de transdução e expansão. As células NK primárias requerem sinais de ativação para promover um crescimento e expansão robustos, o que pode ser desafiador de alcançar ex vivo. Para superar esse desafio, optamos por utilizar células alimentadoras (feeder cells), que demonstraram fornecer sinais coestimulatórios essenciais e suporte de citocinas, promovendo uma proliferação eficaz e sustentada de células NK ex vivo. A linhagem celular CSTX002, desenvolvida pelo laboratório do Professor Lee, é uma versão modificada das células alimentadoras K562, projetada para expressar moléculas coestimulatórias 4-1BBL e IL-21 de membrana (mbIL-21). Essas melhorias fornecem sinais de ativação essenciais, tornando a CSTX002 altamente eficaz em promover uma expansão robusta e escalável de células NK primárias, posicionando-a como uma ferramenta crítica para o avanço das terapias CAR-NK. Apesar disso, persiste um desafio significativo: as células NK primárias exibem resistência à transdução lentiviral, que é o método atualmente usado em nosso laboratório para introduzir os construtos CAR. Para lidar com essa limitação, nosso projeto colaborativo visa testar uma plataforma inovadora de modificação gênica desenvolvida pelo grupo do Prof. Dean Lee. Essa nova abordagem combina eletroporação de Cas9/RNP com transdução via AAV, um método comprovado para possibilitar a inserção precisa e específica de genes CAR em células NK humanas primárias. Vamos comparar essa técnica com nosso método atual baseado em vetores lentivirais (LV) para determinar qual estratégia oferece maior eficiência de transdução e expressão de CAR, com o objetivo de otimizar o processo de modificação genética para células NK primárias.