Geração de células CAR-NK Memory-Like NKG2A KO utilizando CRISPR-Cas9

• Processo: 24/03044-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2025
• Situação: Interrompido
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Rodrigo Nalio Ramos
• Beneficiário: Maria Paula Oliveira Lima
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 25/05497-8 - Geração de Células NK Memory-Like Induzidas por Citocinas Derivadas de hiPSCs para Aplicações na Imunoterapia, BE.EP.MS
• Assunto(s): CRISPR-Cas9 Imunoterapia Mieloma múltiplo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bcma | Car-Nk | CRISPR-Cas9 | imunoterapia | mieloma múltiplo | Nkg2A | Imunoterapia

Resumo

O Mieloma Múltiplo (MM) é caracterizado pela proliferação descontrolada de células plasmáticas monoclonais malignas na medula óssea, afetando a produção de células sanguíneas. Novas estratégias de tratamento utilizam células Natural Killer (NK), principalmente por sua facilidade de manipulação in vitro, gerando células NK com perfil aprimorado para o controle de tumores. Na presença da combinação de citocinas IL-12, IL-15 e IL-18, células NK apresentam propriedades semelhantes à memória imunológica (NK memory-like) como a produção aumentada de IFN-³ e maior persistência. Adicionalmente, estudos pré-clínicos e clínicos com células NK geneticamente modificadas com um receptor de antígeno quimérico (CAR-NK) mostram-se promissoras para uso na imunoterapia alogênica, por sua maior capacidade de proliferação, segurança e persistência contra células tumorais, especialmente quando direcionadas ao antígeno de maturação de células B (BCMA), predominantemente expresso em células plasmáticas de MM. No entanto, diferentes receptores de checkpoint imunológico envolvidos na disfunção de células NK estão sendo investigados visando impedir a evasão de células tumorais da imunovigilância, como o NKG2A, que suprime a atividade de células NK pela sua ligação ao HLA-E, molécula expressa por células do MM em níveis relativamente altos. Uma abordagem favorável para a engenharia genética de células imunes é a tecnologia CRISPR/Cas9, que permite a inserção ou deleção de genes em locais específicos do genoma celular. Neste contexto, este projeto propõe a edição genética de células NK memory-like com CRISPR/Cas9 visando de modo concomitante a deleção do checkpoint imunológico NKG2A e a inserção de uma sequência CAR anti-BCMA como produto de terapia celular para o MM. Uma vez geradas, células CAR-NK NKG2A KO serão caracterizadas quanto ao seu perfil fenotípico e funcional in vitro contra células de MM BCMA+HLA-E+. Dessa forma, propomos gerar células NK geneticamente modificadas otimizando seu perfil funcional, visando, ao mesmo tempo, direcioná-las a um alvo específico e superar a imunossupressão pelo HLA-E em células malignas de MM.