Caracterização de um possível mecanismo de regulação pós- traducional na função da proteína Kcs1 durante a resposta ao dano de DNA em Saccharomyces cerevisiae.

• Processo: 25/00749-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: José Renato Rosa Cussiol
• Beneficiário: Giuliana Monteiro
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 24/10865-3 - Polifosfatos de inositol: Mecanismos de atuação e integração com a resposta ao dano de DNA, AP.R
• Assunto(s): Clonagem Inositol Leveduras Mutagênese sítio-dirigida
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: clonagem | Genotoxinas | Inositol | levedura | mutação sítio-dirigida | Respostas ao dano de DNA | Respostas ao dano de DNA

Resumo

Resumo: A proteína Kcs1 (IP6K1/2/3 em humanos) é uma inositol pirofosfato quinase responsável pela síntese dos pirofosfatos de inositol (PP-IPs). Os PP-IPs constituem uma classe ubíqua de moléculas altamente carregadas e solúveis em água conservadas de leveduras até humanos, desempenhando papéis fundamentais na homeostase celular. Estudos fosfoproteômicos identificaram Kcs1 como uma fosfoproteínas sendo fosforilada em diferentes resíduos de serina e treonina em diferentes condições fisiológicas. Um estudo recente mostrou que a proteína quinase Snf1 (AMPK em humanos) fosforila Kcs1 em dois resíduos de serina promovendo a modulação de sua atividade quinase durante condições de privação de nitrogênio, indicando que Kcs1 pode ter a sua atividade modulada pós- traducionalmente. Esse projeto visa identificar através de espectrometria de massa, resíduos de aminoácidos de Kcs1 fosforilados durante o estresse genotóxico induzido por zeocina. Uma vez que os resíduos sejam identificados, iremos clonar Kcs1 e realizar mutações sítio-dirigidas de modo a substituir os resíduos de Ser/Thr por Ala criando um fosfomutante. Iremos avaliar se a expressão do fosfomutante apresenta fenótipos similares a uma linhagem kcs1 delta, como hipersensibilidade a genotoxinas, defeitos na progressão da replicação ciclo celular assim como alteração em marcadores da DDR.