Análise do efeito da expressão controlada de Hsf1p sobre a função de variantes da proteína humana NAGLU, envolvidas na síndrome de Sanfilippo

• Processo: 24/19423-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2029
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Renata Castiglioni Pascon
• Beneficiário: Gabriela Maria Redondo da Silva
• Instituição Sede: Escola de Artes, Ciências e Humanidades (EACH). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/14056-0 - Análise do efeito da expressão controlada de Hsf1p sobre a função de variantes da proteína humana NAGLU, envolvidas na síndrome de Sanfilippo., AP.R
• Assunto(s): Saccharomyces cerevisiae Biotecnologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Hsf1p | Mucopolissacaridose | Naglu | Saccharomyces cerevisiae | Sindrome de Sanfilippo | Biotecnologia

Resumo

Mucopolissacaridoses (MPSs) é uma subclasse de doenças lisossomais causadas por deficiência em enzimas que catabolizam glicosaminoglicanos; carboidratos cujo acúmulo nos lisossomos causa alterações esqueléticas, cardiopulmonares, auditivas e neurocognitivas. A MPS de tratamento mais difícil é a que envolve comprometimento cognitivo grave, a síndrome de Sanfilippo, ou MPS tipo III, onde ocorre acúmulo de heparan-sulfato nos lisossomos, organelas importantes para o desenvolvimento e homeostase dos neurônios. No presente projeto, propõe-se estudar mutações que afetam a função da ¿-N-acetilglicosaminidase (NAGLU, MPS IIIB), que contribui com cerca de 30% dos casos de Síndrome de Sanfilippo. Pretende-se construir o primeiro modelo experimental para estudar esta doença na levedura Saccharomyces cerevisiae, seguido de testes em células de mamíferos, a fim de realizar estudos funcionais da proteína NAGLU e suas variantes, que apresentam problemas de enovelamento. A localização celular de NAGLU será determinada com a fusão na proteína fluorescente vermelha mScarletI; a atividade enzimática será medida diretamente no extrato de celular, em ensaio na presença do substrato fluorogênico 4-metilumbeliferil-N-acetil-¿-glicosaminídeo; a estabilidade proteica, mensurada por interrupção da tradução com cicloheximida e rastreio da proteína com Western blot. Será estudado se há um nível de expressão de Hsf1p capaz de resolver o problema do enovelamento dos mutantes de NAGLU. Se bem-sucedida, esta prova de conceito poderá indicar que modular a expressão da proteína HSF1 humana é um tratamento potencial da síndrome de Sanfilippo.