Geração de células RPE nocaute para o gene POLH/XPV.

• Processo: 25/06143-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Mutagênese
• Pesquisador responsável: Carlos Frederico Martins Menck
• Beneficiário: Ronaldo Rodrigues Ribeiro
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 19/19435-3 - Papel de danos no DNA e função mitocondrial em envelhecimento vascular, imune e neurológico (DNA MoVINg), AP.TEM
• Assunto(s): Proteína 9 associada à CRISPR Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Reparo do DNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cas9 | Crispr | Polh | Síntese Translesão | Xpv | Reparo de DNA

Resumo

O gene POLH/XPV codifica a polimerase eta. Esta é uma enzima essencial na tolerância ao dano genômico. A xeroderma pigmentosum variante (XP-V) é uma condição genética caracterizada pela deficiência na replicação do DNA em regiões danificadas por radiação ultravioleta. Este projeto tem como objetivo gerar células epiteliais do pigmento da retina (RPE) nocaute para o gene POLH/XPV utilizando o método de CRISPR/Cas9. As células serão transfectadas com o complexo Cas9 e gRNAs específicos em lipossomos e, após o processo de edição genética, serão isoladas e clonadas para validação. O sucesso da deleção será confirmado por sequenciamento genético e análise por Western Blot. Essa abordagem permitirá a geração de um modelo experimental para estudos funcionais nas células mutadas em POLH e treinará o bolsista em técnicas modernas de edição gênica.