Papel da Transidrogenase de NAD(P)+ Mitocondrial (NNT) na Viabilidade e Proliferação de Astrócitos e Células de Glioblastoma em Cultura

• Processo: 25/09703-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: Roger Frigério Castilho
• Beneficiário: Stephanie Maia Acuna
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 23/00229-0 - Papéis fisiopatológicos da NAD(P)+ transidrogenase mitocondrial, AP.TEM
• Assunto(s): Neuroglia Mitocôndrias Proliferação celular Sobrevivência celular Bioenergética mitocondrial
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células Gliais | mitocôndria | Proliferação celular | Transidrogenase de NAD(P)+ | viabilidade celular | Bioenergética mitocondrial

Resumo

A proteína mitocondrial transmembrana transidrogenase de NAD(P)+ (NNT) catalisa a transferência de um hidreto entre o NAD(H) e o NADP(H), acoplada à entrada de um próton proveniente do espaço intermembranar para a matriz mitocondrial. Esse processo pode ocorrer tanto no sentido da geração de NADPH quanto de NADH (reações direta e reversa). Embora ambas as reações sejam fisiologicamente relevantes, o NADPH gerado pela atividade da NNT destaca-se por fornecer poder redutor aos sistemas de detoxificação de peróxidos e por participar de reações anabólicas, como os passos mitocondriais da esteroidogênese. O NADPH fornecido pela NNT também é importante para o metabolismo e a proliferação de células tumorais, sugerindo seu potencial como alvo terapêutico.O presente projeto tem como objetivo elucidar o papel da NNT na proliferação e viabilidade de astrócitos e células de glioblastoma em cultura. Para tal, serão conduzidos estudos comparativos utilizando-se astrócitos obtidos de camundongos C57BL/6 que possuem uma mutação espontânea no gene da Nnt (C57Unib.B6-Nnt-/-), que resulta na ausência de expressão da proteína, e de camundongos congênicos controle com expressão dessa proteína (C57Unib.B6-Nnt+/+). Quanto às células de glioblastoma humano, serão utilizadas as linhagens celulares A172, T98G e U-87MG, empregando técnicas de cultura celular, silenciamento gênico por siRNA e análises bioquímicas e moleculares.Especificamente, objetivamos:1) Caracterizar a importância da NNT na sinalização redox e na proliferação de astrócitos em cultura, bem como o efeito de inibidores da respiração e fosforilação oxidativa nesse modelo;2) Investigar os efeitos de distintos estados metabólicos sobre a atividade da NNT em astrócitos, incluindo a análise de modificações pós-traducionais;3) Avaliar o efeito do silenciamento de NNT na sinalização redox, proliferação e viabilidade de células de glioblastoma e astrócitos em cultura, determinando a expressão de genes relacionados ao metabolismo de NADPH e à resposta antioxidante.Espera-se que o desenvolvimento deste projeto contribua para um melhor entendimento da importância da NNT no metabolismo redox de astrócitos e células de glioblastoma, além de fornecer evidências para o potencial desenvolvimento de estratégias terapêuticas direcionadas à modulação da atividade da NNT em glioblastomas. (AU)