Efeitos de diferentes ácidos graxos no estresse oxidativo de embriões bovinos produzidos in vitro

• Processo: 24/22198-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2025
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Claudia Maria Bertan Membrive
• Beneficiário: Maria Eduarda Rocha Pinto
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Tecnológicas. Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Dracena. Dracena , SP, Brasil
• Assunto(s): Ácidos graxos Bovinos Embrião Estresse oxidativo Glutationa Biotecnologia da reprodução
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ácidos graxos | bovine | embrião | Estresse oxidativo | glutationa | Ômega | Biotecnologia da Reprodução

Resumo

O estresse oxidativo (EO), resultante de um desequilíbrio entre a geração e a eliminação de espécies reativas deoxigênio (EROs), constitui uma limitação no sucesso do desenvolvimento embrionário. A maior intensidade de EOcompromete a qualidade dos oócitos e embriões, reduzindo a capacidade dos oócitos gerarem embriões viáveis. Aadição de ácidos graxos (AGs) em cultivos celulares constitui uma das estratégias para reduzir o EO. Embriões sãocapazes de incorporar e metabolizar AGs adicionados ao meio de cultivo, inclusive alterando sua própria composiçãolipídica. A hipótese é que a suplementação do meio com AGs específicos, durante o cultivo in vitro (CIV) dosembriões, reduz o EO e altera a composição lipídica dos embriões favorecendo a produção embrionária. Objetiva-seavaliar os efeitos do ácido linoleico conjugado (CLA; isômeros cis-9, trans-11 e trans-10, cis-12, ômega-6), ácidolinoleico não conjugado (AL; C18:2n-6, ômega-6) e ácido oleico (AO; C18:1, ômega-9), durante o CIV deembriões bovinos; na produção embrionária, no EO e na composição lipídica de embriões com 8 dias dedesenvolvimento. Os AGs serão diluídos em DMSO; de forma a conter no meio CIV em todos os grupos, 0,20%de DMSO e 2,5% de soro fetal bovino (SFB). Para tanto, durante a CIV serão aplicados os seguintestratamentos: controle com 2,5% de SFB sem a adição de DMSO (controle sem DMSO), controle com 2,5% deSFB com 0,20% de DMSO (controle com DMSO), 100 uM CLA, 100 uM AL e 100 uM AO. A concentração de100 uM baseia-se em resultados prévios obtidos pelo grupo, de experimentos pilotos de dose-resposta para oCLA, AL e AO. A coleta de oócitos será realizada por aspiração folicular de ovários de fêmeas Nelore (Bostaurus indicus) e vacas cruzadas com Nelore (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus) abatidas, provenientes deúnico abatedouro. Os complexos cumulus-oócito (COCs) serão selecionados de acordo com critérios dequalidade, onde serão utilizados apenas oócitos de graus I e II, como citoplasma homogêneo e presença de váriascamadas de células do cumulus. Após a seleção, os COCs serão submetidos à maturação in vitro (MIV), em meioMIV padrão contendo 5% de SFB, em incubadora com temperatura controlada (38,5°C e 5% de CO¿), por 24 horas.Após a MIV, os COCs serão fertilizados com sêmen bovino criopreservado de um único touro Nelore, utilizando ogradiente de Percoll® para seleção de espermatozoides. A fertilização in vitro (FIV) será realizada em gotas de meioespecífico para FIV por 18 horas (D0 = dia da fertilização in vitro). Ao término da FIV, os zigotos serão submetidosà CI, em incubadora em temperatura controlada (38,5°C e 5% de CO¿), onde receberão os respectivos tratamentosdurante 8 dias (D8), com renovação parcial do meio "feeding" no D5. A taxa de clivagem será avaliada 30 horas apóso início da FIV e o desenvolvimento embrionário será monitorado no D7 e D8. No D8 os embriões serão corados comThiolTracker¿ Violet, para serem avaliados quanto o EO, sendo a intensidade da fluorescência diretamenteproporcional à concentração intracelular de glutationa reduzida (GSH) presente nos embriões; em sete repetiçõesexperimentais. No D8, os embriões serão corados por Sudan Black B, para realizarmos uma análise comparativa dadistribuição lipídica nos embriões, onde a intensidade da coloração será medida para cada embrião, onde será avaliadaa área e a intensidade da coloração por volume; em sete outras repetições experimentais. É esperado que osresultados forneçam informações sobre a efetividade da suplementação com AGs no meio CIV de embriões bovinosna prevenção do EO e na composição lipídica dos mesmos. Esses dados podem contribuir para a determinação demelhores condições de cultivo, incrementando a qualidade de embriões produzidos comercialmente in vitro. (AU)