Expressão de Nek4 e Nek6 com mutações pontuais detectados em câncer humano e detecção de alterações funcionais em ensaios in vitro e em células humanas

• Processo: 24/20986-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Letícia Ester dos Santos
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 22/15126-9 - Duas famílias de proteínas reguladoras do ciclo celular: de estudos funcionais e uso como novos marcadores diagnósticos e alvos terapêuticos em câncer, AP.TEM
• Assunto(s): Neoplasias Ciclo celular Mutação Sinalização
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: câncer | ciclo celular | cinase | Mutações | oncoproteína | Sinalização | mecanismos de sinalização, câncer

Resumo

O câncer é uma das doenças que mais vitimizam humanos e animais domésticos. De acordo com o tecido e a célula afetada pelas mutações, um número grande de subtipos de câncer pode ser diferenciado. Num dado subtipo específico de câncer as causas moleculares são bastante heterogeneos e na maioria dos casos somente marginalmente mapeados. Isso representa ao mesmo tempo o maior desafio atual na área, mas também oferece imensas novas oportunidade para o diagnóstico e para novas abordagens terapêuticas. Proteína quinases de vias de sinalização e proteínas reguladoras da proliferação em geral são frequentemente alvos de mutações ativadoras ou inativadoras em câncer e contribuem para o processo de transformação. Nesse projeto focamos nos membros Nek1,4,6,8, 10 e 11 da família de NEK proteína quinases humanas, envolvidos na regulação do ciclo celular, da mitose, do cílio primário, mecanismos de reparo de DNA e funções mitocondriais. Para analisar o efeito de mutações pontuais nas Nek cinases em câncer humano geraremos para cada uma das Neks 4,6, 4 mutações pontuais. Serão para cada Nek: 1 mutação potencialmente ativadora (e.g. G591E - fosfomimético) para o domínio regulatório e de quinase cada e uma potencialmente inativadora (e.g. E273K- "fosfo"deficiente) para domínio regulatório e de quinase. Em seguida as mutações no domínio quinase serão testadas in vitro em ensaio bioquímico de atividade de quinase e comparadas a proteína cinase selvagem. E ensaios celulares exploraremos o efeito das mutações na proteína inteira visando testes de apoptosis, proliferação, ciclo celular, sinalização, migração, metabolismo ou reparo de DNA de acordo com a Nek estudada. Para esse fim teremos células knock out para cada Nek (4,6) essas nessas células serão complementados ou com a proteína selvagem ou com cada uma 5 das 4 mutantes geradas. Assim podemos avaliar se as mutações observadas em câncer têm efeito de perda ou ganho de função nas Neks. (AU)