Conectando os pontos: RPA e R-loops em tripanossomatídeos

• Processo: 25/19954-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 26 de janeiro de 2026
• Data de Término da vigência: 25 de janeiro de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Maria Carolina Quartim Barbosa Elias Sabbaga
• Beneficiário: Giovanna Nalin Parmegiani
• Supervisor: Richard Mcculloch
• Instituição Sede: Instituto Butantan. São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Glasgow, Escócia
• Vinculado à bolsa: 21/12872-9 - Investigação do mecanismo envolvido no transporte de RPA núcleo-citoplasma, BP.DD
• Assunto(s): Biologia molecular Trypanosoma brucei brucei Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia molecular | R-loops | Rpa | Trypanosoma brucei | Trypanosoma cruzi | Parasitologia

Resumo

Parasitas cinetoplastídeos, como Trypanosoma cruzi e Trypanosoma brucei, alternam entre vetores insetos e hospedeiros mamíferos, enfrentando ambientes contrastantes e intensa pressão imune. Prosperar sob tais condições requer a geração de diversidade genética enquanto se preservam funções essenciais. Em T. cruzi, nosso grupo tem estudado o envolvimento de colisões entre replicação e transcrição na variabilidade genética. Em muitos organismos, incluindo tripanossomatídeos, tais conflitos estão frequentemente associados a híbridos DNA:RNA (R-loops), que desempenham papéis regulatórios importantes, mas, quando acumulados, causam estresse replicativo e danos ao DNA. O complexo Replication Protein A (RPA), um fator central de ligação a DNA fita simples, é essencial para a replicação e o reparo, além de também contribuir para a regulação de R-loops em sistemas-modelo; essa conexão, no entanto, permanece inexplorada em tripanossomatídeos. Dados preliminares do meu doutorado indicam que, em T. cruzi, subunidades de RPA se localizam em regiões nucleares ricas em R-loops e interagem com proteínas da família ALBA, reconhecidas como ligantes de R-loops, e com proteínas ribossomais, sugerindo recrutamento para o nucléolo, um importante ponto de acúmulo de R-loops. Além disso, nosso grupo identificou uma possível nova subunidade de RPA (denominada RPA-like) em T. brucei e também encontrou sua expressão em T. cruzi, apoiando, juntamente com evidências de outros organismos, que o complexo RPA pode ser estruturalmente mais diverso do que se pensava anteriormente. Este projeto irá combinar mapeamento genômico, imunoprecipitação de cromatina, proteômica e marcação por CRISPR-Cas9 para investigar interações entre RPA e R-loops e o papel de RPA-like em tripanossomatídeos, aproveitando a expertise do laboratório de destino para avançar a compreensão do equilíbrio entre manutenção e variabilidade genômica nesses parasitas.