Produção e purificação de uma protease rombóide da bactéria hipertermofílica Thermotoga maritima

• Processo: 25/21628-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2027
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Sandro Roberto Marana
• Beneficiário: Vitoria Hashimoto Lima
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/10577-0 - Centro de Pesquisa em Biologia de Bactérias e Bacteriófagos (CEPID B3), AP.CEPID
• Assunto(s): Bactérias Peptídeo hidrolases Enzimas Thermotoga maritima
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bacteria | protease | proteína de membrana | Rombóide | Termofílica | Thermotoga maritima | Enzimas

Resumo

Proteases rombóides são enzimas integrais de membrana com uma estrutura terciária formada por um feixe de seis alfa-hélices transmembranares, sendo encontradas nos domínios Bacteria, Archaea e Eukaria. Estas enzimas hidrolisam outras proteínas de membrana liberando domínios solúveis que têm funções na fisiologia das células. A atividade catalítica das proteases rombóides depende de uma díade Serina e Histidina, posicionadas nas hélices 4 e 6, respectivamente.Thermotoga maritima é uma bactéria anaeróbica hipertermófila encontrada em fontes hidrotermais e fendas vulcânicas no oceano, vivendo na faixa de 55 a 90°C. Esta bactéria possui uma protease rombóide de 235 resíduos de aminoácidos (26,2 kD) compreendendo as seis ¿-hélices transmembranares usais e uma alfa-hélice adicional na extremidade C-terminal. Seus potenciais resíduos catalíticos são a S121 e a H175. Seu papel fisiológico, substrato natural e estrutura terciária ainda não foram estudados.Este projeto tem por objetivo geral produzir a protease rombóide de T. maritima como proteína recombinante em E. coli BL21(DE3), solubilizá-la em micelas de detergente e em seguida purificá-la. Atingidos estes objetivos, estariam abertas as possibilidades de submetê-la a testes de cristalização e reinserção in vitro em bicamadas lipídicas. (AU)