Clonagem, expressão, purificação e estudos estruturais da septina humana 10

• Processo: 07/54715-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: João Alexandre Ribeiro Gonçalves Barbosa
• Beneficiário: Lorrayne Faddoul Cabral de Mello
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem Expressão de proteínas Cristalização Septinas Ciclo celular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ciclo Celular | Clonagem | Cristalizacao | Estudos Estruturais | Expressao | Septina

Resumo

Para que a divisão celular ocorra é necessário que uma célula passe por algumas etapas que possibilitem esta divisão. Ao conjunto destes processos denomina-se ciclo celular. A regulação espacial e temporal destes processos é fundamental para a preservação celular e do material genético. Falha neste processo pode levar à morte celular ou a alterações genéticas causando divisão desregulada e crescimento de tumores. Dentre diversas proteínas envolvidas no ciclo celular, encontram-se as septinas. Até o momento, foram encontrados em humanos 13 diferentes genes para septinas. Neste trabalho será realizada a clonagem, expressão, purificação e estudos estruturais da septina humana 10." Os cDNA destas septinas e a seqüência nucleotídica referente ao domínio GTPase+C-terminal foram amplificados e clonados no vetor pGEM-T-easy vector (Promega) em nosso laboratório. Estas construções serão clonadas para expressão em sistema procarioto. As proteínas deverão ser purificadas por métodos cromatográficos para a realização dos ensaios de cristalização. Uma vez purificada, a proteína será analisada por Dynamic light scatterting (DLS), dicroísmo circular e fluorescência. Testes de cristalização serão realizados utilizando kits disponíveis em nosso laboratório. (AU)