Identificação e caracterização dos receptores do tipo NOD (NLRs) na aterosclerose humana

• Processo: 10/06302-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Maria Heloisa Souza Lima Blotta
• Beneficiário: Rômulo Tadeu Dias de Oliveira
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: aterosclerose | Caspase-1 | IL-1 beta | Il-18 | Inflamação | Nod | Inflamação

Resumo

A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica. Dentre os componentes da resposta inflamatória na placa destacam-se monócitos/macrófagos, células dendríticas, linfócitos, mediadores como IL-1b, IL-18, IL-6, TNF-a, IFN-g, quimiocinas e metaloproteinases, além de moléculas de adesão e ativação celular. A presença de macrófagos e células dendríticas em lesões de ateroma humano indica um papel importante da imunidade inata no seu desenvolvimento. O papel principal dessas células é promover o reconhecimento de antígenos por meio de receptores que reconhecem padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs), como os TLRs (Toll like receptors) e os SRs (scavengers receptors). Recentemente, um novo grupo de receptores de reconhecimento de padrão intracelulares foi descrito recebendo a denominação de receptores do tipo NOD (NLRs), envolvidos no reconhecimento de PAMPs e sinais de stress produzidos pelas células durante infecção ou injúria celular. Os NLRs também estão envolvidos na formação de um complexo multiproteico denominado inflamasoma, que possui a função de agrupar e ativar caspases inflamatórias, como a caspase-1, culminando com a maturação da pró-Interleucina-1b e pró-IL-18 nas formas ativas de IL-1b e IL-18. A IL-1b promove ativação endotelial com consequente recrutamento celular, enquanto que a IL-18 promove amplificação da resposta TH1 provocando aumento do processo inflamatório que pode culminar com ruptura de lesões. Tendo em vista que diversos trabalhos da literatura e dados do nosso grupo mostram a expressão de IL-1b e IL-18 em lesões ateroscleróticas humanas, o objetivo deste trabalho é identificar e avaliar a função dos NLRs em lesões de ateroma humano. Para tal, inicialmente será avaliada a expressão tecidual do RNAm e das proteínas NLRC1, NLRC2, NLRC4, NLRP1, NLRP3, IL-1b; IL-18; ASC; caspase-1 e AIM2 pelos métodos de RT-PCR, imunoistoquímica e western blot. A expressão destes receptores e mediadores também será avaliada em lesões de ateroma humano, células mononucleares do sangue periférico (CMSP) e células de linhagem monocítica humana (THP-1) após a estimulação, in vitro, com produtos que sabidamente promovem aterogênese, como LDLox, HSP60 e cristais de colesterol. O papel dos inflamasomas será determinado mediante o uso de inibidores farmacológicos ou pela utilização de siRNA. Para finalizar vamos demonstrar quais mecanismos estão envolvidos na ativação dos inflamasomas frente aos antígenos utilizados. (AU)