Transformação do Paracoccidioides brasiliensis com plasmídeos contendo cassete para inativação do gene PbGP43

• Processo: 04/00457-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rosana Puccia
• Beneficiário: Thiago Rodrigues da Veiga
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Transformação genética Técnicas de cocultura Eletroporação Paracoccidioides brasiliensis Agrobacterium tumefaciens
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Agrobacterium | Eletroporacao | Inativacao Pbgp43 | P. Brasileiros | Transformacao

Resumo

O objetivo deste projeto é estabelecer um sistema de transformação do Paracoccidioides brasiliensis testando as estratégias de eletroporação e co-cultura com Agrobacterium tumefaciens, as quais têm sido empregadas com sucesso na transformação dos fungos dimórficos Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum. Nossa estratégia envolve o uso de duas construções contendo o gene marcador de resistência à higromicina em substituição ao PbGP43, mantendo parte das regiões não traduzidas flanqueadoras. Acredita-se que nas colônias resistentes ao marcador haverá integração no cromossomo, e, em um certo número delas, haverá integração sítio específica por recombinação homóloga para interrupção gênica do PbGP43. Os transformantes serão testados por Southern blot e PCR para avaliar a presença dos insertos no cromossomo. A expressão da proteína será avaliada por dot-blot e Western Blot. O PbGP43 foi escolhido porque codifica a gp43, que é um antígeno protetor e potencial fator de virulência. A proteína e seu gene têm sido alvo de pesquisa contínua do laboratório. (AU)