Glico(lipidoma) de fungos patogênicos. Identificação/caracterização de lipídeos e glicoconjugados presentes em microdomínios de membrana.

• Processo: 09/12003-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Helio Kiyoshi Takahashi
• Beneficiário: Anna Christina Carvalho Coutinho Do Nascimento
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 06/07005-4 - Microdomínios de membrana ricos em (glico) (esfingo) lipídeos e esteróis: organização, função e sinalização, AP.TEM
• Assunto(s): Espectrometria de massas Glicoesfingolipídeos Carboidratos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biossíntese de lipídeos | Carboidratos | espectrometria de massa | Glicoesfingolipídeos | (glico)proteínas | microdomínios de membrana | Espectrometria de macromoléculas

Resumo

Fungos apresentam componentes lipídicos peculiares, como: ergosterol, inositolfosforilceramidas (IPCs), glicosilinositolfosforilceramidas (GIPCs) e glicoesfingolipídeos (GSLs), que apresentam estruturas únicas nestes organismos. A presença de ergosterol tem se mostrado essencial para a integridade da membrana plasmática dos fungos e, portanto, fundamental para sua sobrevivência. Drogas que bloqueiam a síntese de ergosterol formam uma das linhas terapêuticas mais eficazes contra algumas micoses, como os compostos azólicos e os polienos. Entretanto, células fúngicas podem tornar-se resistentes a agentes antimicóticos por meio de alterações na biossíntese de lipídeos. A resistência fúngica a derivados azólicos, por exemplo, resulta do acúmulo gradual de alterações como: mutações em enzimas da via de síntese do ergosterol; aumento da expressão de bombas de efluxo e diminuição do ergosterol da membrana em favor de um aumento de outros esteróis e de fosfolipídeos. O foco do presente projeto será a caracterização quantitativa e qualitativa da expressão de esteróis, esfingolipídeos e polissacarídeos de parede em fungos tratados com diferentes inibidores da biossíntese dessas moléculas. As análises serão realizadas por HPTLC, cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa e HPLC acoplada a espectrometria de massa. Os objetivos são: i) o estudo da função biológica de lipídeos e glucanas na sobrevivência das células fúngicas e ii) a identificação de vias metabólicas envolvidas nos processos de escape/resistência de fungos a compostos inibidores da biossíntese de lipídeos e glucanas. Utilizando eletroforese bidimensional, HPLC e espectrometria de massa, analisaremos, ainda, as proteínas presentes em microdomínios de membrana enriquecidos em esfingolipídeos (GEMs) de fungos. Com a análise de proteínas, buscamos um melhor entendimento da organização dos GEMs de fungos e de sua relação com a adesão e internalização dos fungos em células de mamíferos, bem como a descoberta de proteínas com funções essenciais à sobrevivência dos fungos que poderiam ser utilizadas como alvo para novas drogas.