Expressao, purificacao e cristalizacao do(s) complexo(s) calmodulina/motivos iq do dominio pescoco da miosina-va.

• Processo: 02/00208-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Roy Edward Larson
• Beneficiário: Renata Rocha de Oliveira
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 99/03951-7 - Caracterização bioquímica, estrutural e celular de Miosina-V, AP.TEM
• Assunto(s): Calmodulina Estrutura de proteína Cálcio
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Calcio | Calmodulina | Estrutura De Proteina | Miosina-Va | Motivos Iq

Resumo

Neste projeto pretendemos determinar a estrutura molecular do complexo calmodulina com um ou mais dos motivos IQ da miosina V. Os motivos IQ são seqüências de 23 a 25 aminoácidos contendo a seqüência consenso, IQxxxRGxxxRxxf, que fazem parte do domínio pescoço da miosina V e que são sítios de ligação para cadeias leves como calmodulina. O íon cálcio regula as atividades mecanoquímicas da MVa via sua interação com calmodulina no domínio pescoço, levando alterações conformacionais que são transmitidas do domínio pescoço para o domínio cabeça. Portanto, este projeto pretende investigar os elementos estruturais da interação IQ/calmodulina induzidos pelo cálcio. Já temos clonado a região pescoço da miosina Va de galinha e pretendemos aperfeiçoar sua expressão em bactéria e a purificação de proteína recombinante. Preparamos calmodulina de cérebro de boi em larga escala e com alto grau de purificação para fazer os complexos. Já temos peptídeos sintéticos correspondentes as IQs para estudos de formação de complexos específicos via estudos de fluorescência. Pretendemos determinar a estrutura molecular de pelo menos um complexo IQ/calmodulina via cristalização e/ou NMR. (AU)