Obtenção e caracterização bioquímica e molecular da prolina desidrogenase (podh) e da pirrolina 5 carboxilato desidrogenase (p5cdh) de trypanosoma cruzi: as enzimas da via prolina - glutamato

• Processo: 09/52753-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2009
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia
• Pesquisador responsável: Ariel Mariano Silber
• Beneficiário: Flávia Menezes Zimbres
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Metabolismo de aminoácidos Redes e vias metabólicas Prolina Trypanosoma cruzi
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Metabolismo De Aminoacidos | Podh | Prolina | P5Cdh | Trypanosoma Cruzi

Resumo

O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, é um protozoário hemático com um complexo ciclo de vida. Neste parasita, assim como em outros organismos dos gêneros Trypanosoma e Leishmania está bem estabelecido que os aminoácidos constituem uma fonte de carbono e energia relevante. Em particular em T. cruzi, foi descrita a participação de aminoácidos em vários outros processos na sua biologia, tais como diferenciação e resistência a diferentes tipos de estresse. Entre os aminoácidos mais relevantes pelas suas múltiplas funções destaca-se a prolina. Sabe-se que o T. cruzi é capaz de metabolizar ativamente prolina através da sua conversão em glutamato e, posteriormente, em intermediários do ciclo dos ácidos tricarboxílicos. A via metabólica que leva à conversão de prolina a glutamato neste organismo vem sendo estudada no nosso laboratório. Essa via consta de dois passos enzimáticos: 1: conversão de prolina em deitai-pirrolina-5-carboxilato ou P5C (este passo acontece através das enzimas prolina oxidase ou prolina desidrogenase, dependendo do organismo). 2: Conversão de P5C em glutamato (através da enzima P5C desidrogenase). Genes codificantes de ambas as enzimas já foram clonados e as atividades dos seus produtos protéicos demonstradas por complementação de leveduras knock out para os correspondentes ortólogos no nosso laboratório. Para completar o conhecimento desta via metabólica relevante, propõe-se no presente projeto obter as enzimas mediante expressão em sistemas bacterianos dos genes em estudo, para sua caracterização em termos bioquímicos e moleculares. (AU)