Utilizacao de espectros de fluorescencia na observacao de estados conformacionais de proteases.

• Processo: 05/51083-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2005
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Luiz Juliano Neto
• Beneficiário: Douglas de Andrade
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 03/09994-7 - Substratos e inibidores peptídicos para enzimas proteolíticas, AP.PRNX.TEM
• Assunto(s): Fluorescência Peptídeo hidrolases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Conformacao De Proteinas | Fluorescencia | Proteases | Sonda Fluorescente Ans

Resumo

O estudo das propriedades hidrolíticas das peptidases propicia o entendimento de seu mecanismo de ação e de sua especificidade. Esta propriedade é função tanto das características químicas dos subsítios de cada peptidase quanto da natureza do substrato que com ela interage. Modificações no solvente, tais como alterações de pH e força iônica podem afetar tanto o estado de protonação de resíduos de aminoácidos envolvidos diretamente no processo catalítico quanto à estrutura da proteína. Esta alteração estrutural pode ser sutil, caracterizando-se por alterações no alinhamento de resíduos de aminoácidos formadores do sítio catalítico ou ainda provocando mudanças conformacionais mais acentuadas. O ANS é uma sonda fluorescente largamente utilizada para acompanhar estes estados conformacionais e depende de três fatores principais (i) ligação da sonda à proteína; (ii) presença ou ausência de água; (iii) proximidade a domínios hidrofóbicos da proteína. Pretendemos com a execução deste projeto acompanhar mudanças conformacionais nas peptidases atualmente em estudo no laboratório através de sua ligação à sonda fluorescente ANS (1-8 anilino de naftalenosulfonato) e por medidas de fluorescência intrínseca. Esse estudo poderá fornecer importantes indícios sobre o efeito de solventes, pH e temperatura na atividade catalítica destas enzimas. (AU)