Determinacao dos sitios subcelulares de producao de especies reativas de oxigenio e oxido nitrico em cultura de celulas musculares utilizando sondas fluorescentes e sua aplicacao in vivo em ...

• Processo: 03/05526-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2003
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia do Esforço
• Pesquisador responsável: Rui Curi
• Beneficiário: Leonardo dos Reis Silveira
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 04/12137-1 - Estudo dos mecanismos de ação dos ácidos graxos em leucócitos, AP.TEM
• Assunto(s): Ácidos graxos Espécies de oxigênio reativas Fluorescência Células musculares Microdiálise Óxido nítrico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acidos Graxos | Celulas Musculares | Especies Reativas De Oxigenio | Fluorescencia | Microdialise | Oxido Nitrico

Resumo

As EROs e NO exercem funções importantes no tecido muscular, como a regulação do fluxo sanguíneo, metabolismo de glicose e da força de contração. Contudo, pouco se sabe sobre a formação intracelular dessas espécies durante a atividade muscular. Evidências da produção dessas espécies in vivo são escassas devido à instabilidade dessas e a falta de um método adequado à situação experimental. A nossa proposta é de avaliar a participação das mitocôndrias, da enzima xantina oxidase (XO) e dos peroxissomos na produção subcelular de EROs e da enzima óxido nítrico sintase (NOS) na formação de NO durante contrações intensas in vitro utilizando cultura de células musculares. A produção mitocondrial de EROs será determinada com as sondas DCFH-DA e "MitoTracker Red". A participação da XO na produção intracelular de EROs será examinada através do inibidor da XO alopurinol. A participação dos peroxissomos será examinada pela incubação das células com ácidos graxos de cadeia longa, que se eleva no exercício. Para a identificação dos sítios de produção de NO inibidores da enzima óxido nítrico sintase serão utilizados com a sonda DAF-2-DA. Em adição, a determinação de EROs e NO será realizada in vivo, utilizando ratos e humanos. A determinação de NO e H2O2 será realizada com as sondas DAF-2-BSA e DCFH-BSA em combinação com a técnica de microdiálise. (AU)