Efeitos dos ácidos sobre a produção e sinalização de ceramidas e fosfatidilnositol (3,4,5)trifosfato em linfócitos humanos

• Processo: 07/58316-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2008
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Geral
• Pesquisador responsável: Rui Curi
• Beneficiário: Renata Gorjao
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 04/12137-1 - Estudo dos mecanismos de ação dos ácidos graxos em leucócitos, AP.TEM
• Assunto(s): Proliferação celular Linfócitos Ácidos graxos Ceramidas Fosfatidilinositóis
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Acidos Graxos | Ceramida | Fosfatidilinositol | Linfocitos | Proliferacao | Sinalizacao

Resumo

A ativação de linfócitos exerce papel importante em muitas patologias, principalmente em doenças auto-imunes e inflamatórias. Os ácidos graxos (AGs) podem atuar como moléculas biologicamente ativas na regulação de várias funções de linfócitos. Neste projeto, estudaremos o efeito dos ácidos graxos na geração de fosfatidilinositol (3, 4, 5) trifosfato e ceramidas e o possível papel destes segundos mensageiros na regulação da ativação de proteínas relacionadas com a proliferação celular. Será avaliado o efeito dos seguintes AGs: o ácido graxo saturado palmítico (16:0) (PA) e o monoinsaturado oléico (18:1, n-9) (OA) que são os mais abundantes na circulação, o ácido graxo poliinsaturado n-6 linoléico (18:2) (LA), que é o principal constituinte do óleo de soja e, portanto, muito abundante na dieta, e os ácidos graxos poliinsaturados n-3 eicosapentaenóico (20:5, n-3) (EPA) e docosa-hexaenóico (22:6, n-3) (DHA), os principais constituintes dos óleos de peixe que têm enorme aplicação terapêutica. Inicialmente, os linfócitos humanos serão tratados com 50 μM de PA, DHA e EPA e 25 μM de OA e LA na presença e ausência de IL-2. Nestas concentrações, PA, EPA e DHA diminuem a capacidade proliferativa dos linfócitos humanos induzida pela IL-2 após 1 h de tratamento. Já OA e LA exacerbam a proliferação induzida pela IL-2. Inicialmente avaliaremos os efeitos dos ácidos graxos na presença dos inibidores da fosfatidilinositol 3 quinase (PI3K), wortmanina e Ly 294002, ou na presença do inibidor da síntese de ceramida sintase Fumonisina B2 sobre a proliferação celular, fosforilação das proteínas JAK 1 e 3, ST AT 5, ERK 1/2, Akt e PKC-zeta, atividade da PKC- e ativação de NF-KB. Avaliaremos o efeito dos ácidos graxos sobre a síntese de ceramidas por HPLC e sobre a formação de fosfatidilinositol (3,4,5) trifosfato pelo método de HPLC de troca iônica. Posteriormente, realizaremos um "knock out" in vitro (RNA de interferência) da esfingosina quinase 1, responsável pela síntese de esfingosina 1-fosfato que está relacionada com proliferação e sobrevivência celular, para comprovar o envolvimento do metabolismo de esfingolipídios nos efeitos dos ácidos graxos em linfócitos. (AU)