Subclonagem da miosina-V de galinha e sua expressão em bactéria, levedura e melanócito

• Processo: 92/03441-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 1993
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 1993
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Enilza Maria Espreafico
• Beneficiário: Enilza Maria Espreafico
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Calmodulina Transfecção Miosina tipo V Melanócitos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Calmodulina | Levedura | Melanocito | Miosina | Transfeccao

Resumo

Recentemente sequenciamos cDNAs codificantes da cadeia pesada da miosina-V de cérebro de galinha (p190). Verificamos que esta assemelha-se ao produto do gene MY02 de levedura e é virtualmente idêntica ao produto do gene Dilute de camundongo. Neste projeto pro pomos: 1. Subclonar o cDNA codificante completo desta miosina-V e seus domínios estruturais em vetores para expressão em bactéria, levedura e células de mamífero; 2. Expressar esta proteína e seus domínios estruturais em bactéria e caracterizá-los; 3. Transfectar levedura myo2 para determinar se a miosina-V de galinha é capaz de restaurar o fenótipo desse mutante, e melanócito dilute Cloudman-S91 para analisar sua morfologia em condição de expressão/superexpressão desta miosina, procurando estabelecer um modelo de estudo; 4. Avaliar como obtê-la nativa para, solução da estrutura tridimensional. (AU)