Desenvolvimento de substratos fluorogênicos com supressão intramolecular da fluorescência para estudos de endoglicosidades

• Processo: 01/01469-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2001
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Ivarne Luis dos Santos Tersariol
• Beneficiário: Ana Paula Bergamo Araujo
• Instituição Sede: Diretoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Extensão. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 97/13133-4 - Estudo da atividade de proteinases e glicosidases capazes de degradar componentes da matriz extracelular, AP.JP
• Assunto(s): Cinética enzimática Enzimas Glicosaminoglicanos Fluorescência
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Endoglicosidades | Fuoroforos | Glicosaminoglicanos | Substratos Fluorogenicos | Supressores De Fluorescencia

Resumo

Apesar da importância das endoglicosidases na progressão e metástase tumoral, pouco se conhece sobre o comportamento cinético destas enzimas, Devido às suas características de hidrolase e endoglicosidase, os métodos atuais utilizados na detecção e quantificação desta classe de enzimas, apesar de sensíveis, são poucos práticos para um apurado estudo cinético. Os presentes métodos disponíveis envolvem: utilização de substratos radioativos, caracterização da clivagem por cromatografia em gel-filtração, imobilização do substrato em fase sólida, cromatografia de afinidade e solubilização diferencial do produto em detergente catiônico. Analogamente, para as endopeptidases, te problema foi solucionado com a utilização de substratos fluorogênicos pela técnica de supressão intramolecular da fluorescência. Por esta técnica, além das endoglicosidases que quebram as ligações glicosídicas por hidrólise, também poderia ser estudado as endoglicosidases que quebram as ligações pela via eliminativa, como é o caso das enzimas bacterianas extraídas de F. heparinum,Temos como objetivo o desenvolvimento de um método de síntese de substratos com supressão intramolecular da fluorescência para endoglicosidades. Assim como descritos para substratos peptídicos, o substrato polissacarídeo a ser desenvolvido deverá possuir grupamentos aceptores (supressores da fluorescência) e doadores de elétrons (fluoróforos) na sua estrutura, estabelecendo a supressão intramolecular. (AU)