Recuperação e isolamento da beta-galactosidase por partição de bioafinidade em sistemas de duas fases aquosas

• Processo: 94/06199-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 1995
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 1999
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Tecnologia de Alimentos
• Pesquisador responsável: Telma Teixeira Franco
• Beneficiário: Maria Estela Stenico
• Instituição Sede: Centro Pluridisciplinar de Pesquisas Químicas, Biológicas e Agrícolas (CPQBA). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Paulínia , SP, Brasil
• Assunto(s): beta-Galactosidase Cromatografia de afinidade Processos de separação Sistema de duas fases aquosas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Beta-Galatosidase | Bioafinidade | Participacao | Separacao | Sistema De Duas Fases Aquosas

Resumo

Os Sistemas de Duas Fases Aquosas (SDFA) são utilizados para extração e purificação de proteínas de elevado valor biológico, devido à redução do custo operacional em relação a processos convencionais e possibilidade de integração aos mesmos, além da operação contínua e controle facilitado. Os SDFA podem substituir as etapas iniciais da purificação e da cromatrografia de proteínas e podem também ser facilmente escalonados, sem perda na eficiência do processo. Outras características desejáveis destes sistemas são as propriedades fisico-químicas das fases (viscosidade, diferença de densidade) e o fato dos polímeros possuírem caráter de não-toxidade e serem biodegradáveis. A enzima lactase ou β-galactosidase possui inúmeras aplicações na área de tecnologia de produtos lácticos, ou seja, produtos industrializados que possuam lactose. Produtos hidrolisados por lactases ainda não são produzidos no Brasil e uma demanda por tal tipo de produto poderia ser atendida no caso desta enzima ser produzida a baixo custo e possuir elevada qualidade. A enzima β-galactosidase possui um inibidor especifico que é o APGP (p- aminofenil-β-D-tiogalactopiranosídeo), que pode ser ligado covalentemente a compostos como tensoativos e polímeros. A síntese de polímeros de afinidade será realizada com a introdução do ligante APGP (p-aminofenil-β-D-tiogalactopiranosideo) ao polímero PEG (polietilenoglicol) de diferentes pesos moleculares, sendo que eles serão caracterizados segundo o grau de substituição, capacidade de recuperação da enzima alvo, estabilidade do polímero-ligante e facilidade de reciclagem. Este projeto tem como objetivo geral, o desenvolvimento de um sistema de recuperação e purificação da enzima β-galactosidase fundamentado em bioafinidade. Numa primeira etapa, um sistema de duas fases aquosas utilizando bioafinidade será desenvolvido para a recuperação da enzima alvo e diminuição da contaminação por outras moléculas. Numa segunda etapa, esta enzima deverá ser eluída de forma já purificada. Objetivos específicos descritos em detalhe na íntegra do projeto serão desenvolvidos para viabilizarem a concretização do objetivo geral. Este sistema de separação a ser desenvolvido deverá aumentar a seletividade e o rendimento de produção da enzima facilitando a ampliação da escala do processo. (AU)