Cinética da expressão gênica diferencial durante a ontogenia do timo

• Processo: 00/01705-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2000
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunogenética
• Pesquisador responsável: Geraldo Aleixo da Silva Passos Júnior
• Beneficiário: Aline Renata Espanhol
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Timo Expressão gênica Maturação Linfócitos T Recombinação V(D)J
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Desenvolvimento Do Timo | Dna - Arrays | Expressao Genica | Genes Rag | Maturacao De Linfocitos T | Recombinacao Vdj

Resumo

Este projeto situa-se no campo da imnnogenética molecular da expressão dos genes RAG-1 e RAG-2, do locus do receptor de linfócitos T beta (TCRβ), de citocinas e do retrovírus durante o desenvolvimento fetal do timo de linhagens isogênicas de camundongos (Balb-c, C57BL/6 e CBA/J). O controle da maturação dos linfócitos T e da recombinação V(D)J de receptores de células T (TCRs) nos timócitos em diferenciação e expressão gênica no timo, é assunto atual de pesquisas. Mesmo com a descrição do papel essencial dos genes RAG-1 e RAG-2 atuando diretamente no mecanismo do rearranjo entre segmentos V e C, vários outros produtos de genes tais como o da interleucina-7 (IL-7), MHC e os próprios transcritos de TCRβ têm sido relacionados com a maturação dos linfócitos T e o rearranjo de receptores de células T (TCR). Resultados anteriores do nosso laboratório mostram que os genes RAG-1 e RAG-2 se expressam no timo fetal a partir do 13º dia de gestação nestas linhagens de camundongos. Entretanto, a emergência da recombinação V(D)J nos loci de TCRα e TCRβ se mostrou diferente nestas três linhagens, mas não a expressão (RNAm) destes genes que se inicia no 14º dia de gestação em todas as linhagens. Surgem perguntas sobre o que controla o início da recombinação V(D)J. Quais seriam os fatores genéticos que atuariam além dos genes RAG no controle da recombinação? Nosso Laboratório já vem desenvolvendo trabalhos neste sentido, estudando diferentes linhagens isogênicas como modelo para testarmos o efeito das diferenças do background genético na emergência da recombinação de receptores de células T (TCRs). Na primeira parte deste projeto, pretendemos avaliar e quantificar a expressão temporal de alguns genes envolvidos no processo, tais como o próprio TCRP, RAG-1, RAG-2 e citocinas relacionando com a emergência da recombinação do locus TCRβ. O locus TCRβ foi escolhido, pois a expressão de transcritos "germline" deste gene parece ter efeito sobre sua própria recombinação. Além disso, sabemos que o superantígeno do retrovírus MMTV está associado de alguma forma ao locus TCRβ, pois a expressão deste vírus resulta em uma deleção de células T auto-reativas durante a seleção negativa no timo e eliminação destas células infectadas pelo MMTV. As linhagens isogênicas de camundongos constituem um modelo interessante e viável para estudos comparativos da expressão gênica diferencial. Em nosso Laboratório, pretendemos ensaiar a expressão dos genes acima mencionados usando métodos clássicos de biologia molecular tais como RT-PCR e hibridação molecular, chegando até a uma análise bastante abrangente da expressão gênica que é o uso de DNA-arrays. Os resultados serão úteis para o entendimento da influência da expressão dos diferentes genes na ontogenia tímica e maturação das células T. (AU)