Envolvimento da enzima antioxidante Thiol Specific Antioxidant (TSA) na resposta adaptativa de leveduras ao estresse oxidativo, estudo da regulação da expressão do gene para TSA

• Processo: 97/14204-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 1998
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 1999
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Luis Eduardo Soares Netto
• Beneficiário: Ana Paula Dias Demasi
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 95/09710-0 - Oxidação de proteínas e atividade antioxidante da enzima 'Thiol Specific Antioxidant' (TSA), AP.JP
• Assunto(s): Leveduras Peroxidase Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressao Genica | Leveduras | Peroxidase | Resposta Celular | Tiol

Resumo

Espécies reativas de oxigênio têm sido associadas a vários processos patológicos como carcinogênese, envelhecimento e arteriosclerose. As células possuem um sistema de defesas contra espécies reativas de oxigênio que inclui antioxidantes de baixo peso molecular, enzimas antioxidantes e enzimas de reparo. "Thiol Specific Antioxidant" (TSA) é uma nova proteína antioxidante recentemente isolada de Saccharomyces cerevisae, cuja seqüência de amino ácidos apresenta homologia com proteínas de diferentes grupos taxonômicos (protistas, bactérias, leveduras e animais). Recentemente foi demonstrado que as propriedades antioxidantes de TSA in vitro se devem ao fato dessa proteína possuir atividade peroxidática dependente de tiól: 2 RSH + H2O2 → RS SR + 2 H2O (Netto e col., 1996). Este projeto de pesquisa visa obter mais evidências do possível papel antioxidante de TSA in vivo, estudando a resposta de leveduras ao estresse oxidativo induzido por H2O2. Estudaremos comparativamente as respostas a ação de H2O2 em duas linhagens de Saccharomyces cerevisae: uma selvagem e a outra isogênica, exceto em relação ao gene para TSA que foi interrompido. Mediremos a viabilidade celular pela formação de colônias em placas YPD e o crescimento celular por absorção óptica. O envolvimento de TSA em respostas adaptativas induzidas por outros agentes físico-químicos também será estudado para se ter uma idéia mais ampla da função celular desta proteína em leveduras. A resposta adaptativa de leveduras a H2O2 envolve o aumento na expressão de pelo menos 21 proteínas, por isso mediremos a expressão do gene para TSA por Nothern e Western blot. A ação de peróxidos, tióis (substratos da reação catalisada por TSA) e glicose (um repressor da síntese de algumas enzimas antioxidantes) na expressão do gene para TSA também será estudada. Também investigaremos o envolvimento de diferentes fatores de transcrição (por exemplo: yAP-1, yAP-2, HAP-1 e MAC-1) na síntese de TSA. (AU)