Identificação e isolamento de proteínas que se ligam aos telômeros de Leishmania amazonensis utilizando seleção genética em levedura (sistema one-hybrid)

• Processo: 01/12782-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2002
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Maria Isabel Nogueira Cano
• Beneficiário: Cristina Braga de Brito Lira
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 00/01138-6 - Complexo telomérico de Leishmania spp: dinâmica da replicação, otimização da purificação da telomerase e identificação de possíveis componentes da holenzima, AP.JP
• Assunto(s): Telômero Proteínas de ligação a telômeros Seleção genética Leishmania mexicana
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Leishmania Amazonensis | Proteinas Telomericas | Selecao Genetica | Sistema One-Hybrid | Telomero

Resumo

Os telômeros formam as extremidades físicas dos cromossomos de eucariotos, são constituídos por seqüências simples de DNA, repetidas em tandem, associadas as proteínas e mantidos pela telomerase, que é capaz de adicionar novas seqüências teloméricas no terminal cromossômico da fita rica em G. As extremidades dos cromossomos de Leishmania são compostos da seqüência telomérica 5'-TTAGGG-3', conservada entre os tripanosomatídeos e outros eucariotos. Até o momento, se conhece muito pouco sobre a complexidade da estrutura telomérica e dos fatores que compõe essa cromatina nas Leishmanias. Nossa proposta é identificar componentes proteicos que se ligam especificamente ao DNA telomérico de L. amazonensis, utilizando seleção genética em levedura (sistema "one-hybrid"). A seqüência telomérica do parasita associada a um marcador de seleção, será integrada no genoma das leveduras. As linhagens modificadas serão co-transformadas com uma genoteca de cDNA do parasita construída em fusão com o domínio ativo de um fator de transcrição (Gal4). Os transformantes candidatos à expressão das proteínas teloméricas serão identificados em meio mínimo seletivo para o marcador de seleção e subclonados em vetor bacteriano para se proceder com as análises funcionais. Escolhemos L. amazonensis para este trabalho por ser uma das espécies mais amplamente distribuídas e um dos principais causadores das leishmaniose cutânea e cutâneo-difusa no Brasil. (AU)