Estudo da inibicao do desenvolvimento de embrioes murinos por anticorpos anti h-y.

• Processo: 96/12134-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 1997
• Data de Término da vigência: 31 de março de 1999
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Cesar Roberto Esper
• Beneficiário: Mariney Flavia Pereira di Tanno Ramalho
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Assunto(s): Embrião Sexagem Antígeno H-Y
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antigeno H-Y | Embriao | Sexagem

Resumo

O melhoramento genético animal beneficia-se, em um programa de seleção adequado, da superovulação e da transferência de embriões. A sexagem de embriões deve incrementar a aceleração do melhoramento genético animal, pois otimizará o progresso genético anual. Dentre os métodos desenvolvidos para sexagem de embriões o mais promissor é o imunológico que se baseia na detecção de um antígeno macho-específico denominado H-Y. O presente projeto tem como objetivos: analisar o efeito do cultivo de embriões murinos com anticorpos anti H-Y na inibição do desenvolvimento de mórulas e no desvio da proporção sexual, verificar a acuidade de identificação do sexo pela inibição do desenvolvimento, utilizando a técnica de sexagem pelo método de biologia molecular (PCR) e verificar, por microscopia eletrônica e imunohistoquímica, a ocorrência do fenômeno do capping nos embriões murinos cultivados com anticorpos anti H-Y. Para tal, embriões murinos no estádio de mórula compacta serão incubados com anticorpos anti H-Y a 37º Celsius em estufa a 5% de CO2 em ar, por um período de 6-24 horas. Considerando o desenvolvimento dos embriões após o cultivo, os embriões serão classificados em 2 grupos: 1) aquele cujo os embriões tiveram o desenvolvimento inibido no estádio de mórula; 2) aquele cujo os embriões desenvolveram-se durante o cultivo e houve a formação de blastocele. Os embriões cujo desenvolvimento foi inibido durante o cultivo com anticorpo anti H-Y serão tipados como do sexo masculino; aqueles cujo desenvolvimento não for afetado pelos anticorpos, serão tipados como do sexo feminino. Os resultados serão confirmados por PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Para produção do anticorpo anti H-Y utilizar-se-ão ratas de uma linhagem isogênica. A atividade do anticorpo será verificada através do teste de ELISA (Enzime-Linked Immunosorbent Assay). Alguns embriões de cada grupo serão preparados para microscopia eletrônica e para imunohistoquímica afim de elucidar o fenômeno que leva a inibição do desenvolvimento de embriões macho quando cultivados com anticorpos anti H-Y. Os dois grupos de embriões serão submetidos à análise de variância das características estereológicas para técnica de microscopia eletrônica e à análise morfométrica, no analisador de imagem Videoplan (Kontron eletronics - Carl Zeiss do Brasil) afim de obter os resultados da técnica de imunohistoquímica. (AU)