Estudos moleculares de inibidores de proteases presentes em diferentes tecidos do carrapato boophilus microplus.

• Processo: 02/02147-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Aparecida Sadae Tanaka
• Beneficiário: Sergio Daishi Sasaki
• Instituição Sede: Instituto Nacional de Farmacologia (INFAR). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Hemolinfa Peptídeo hidrolases Inibidores Carrapatos Boophilus microplus
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Boophilus Microplus | Carrapato | Expressao De Proteina | Hemolinfa | Inibidor | Protease

Resumo

Neste projeto, o gene BmTIsint, obtido em projeto de mestrado anteriormente realizado, será subclonado no vetor de expressão pPIC9 e a proteína expressa em levedura P. pastoris. A proteína purificada por cromatografia de afinidade será caracterizada quanto à atividade inibitória sobre proteinases e isolada por cromatografia líquida de alta performance para a determinação da estrutura primária parcial. Após a caracterização bioquímica o inibidor recombinante, BmTIsint, será utilizado na imunização de camundongos Balb-C para a produção de anticorpos policlonais, assim como em ensaio de imunização de bovinos. O anti-soro dos bovinos será coletado ao longo do experimento e analisado por ELISA, teleóginas serão coletadas dos bovinos imunizados, contadas e avaliadas quanto ao peso, a postura e a viabilidade dos ovos em comparação com o grupo controle. Paralelamente, hemolinfa e corpos gordurosos serão extraídos de teleóginas do carrapato B. microplus. O anti-soro dos camundongos imunizados com BmTIsint será utilizado na seleção de proteínas por "western-blotting" de hemolinfa e de extrato de corpos gordurosos. As proteínas reconhecidas pelo anti-soro anti-BmTIsint serão analisadas utilizando espectrometria de massa ou por seqüênciamento automático da porção N-terminal. Os resultados obtidos serão analisados por comparação com bancos de dados já existentes (Swiss-prot, NCBI, GeneBank). (AU)