Clonagem e expressão em bactérias das enzimas hexoquinases (1 e 2) e glicoquinase da levedura Saccharomyces cerevisiae com vistas a cristalização e estudos estruturais

• Processo: 00/07514-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2000
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira
• Beneficiário: Odalys García Cabrera
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 95/09449-0 - Regulação gênica em eucariotos: investigação de mecanismos de controle da transcrição de diferentes espécies em Saccharomyces cerevisiae, AP.JP
• Assunto(s): Clonagem Expressão de proteínas Purificação de proteínas Elementos estruturais de proteínas Hexoquinase Saccharomyces cerevisiae Cristalografia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Cristalografia | Expressao | Glicoquinase | Hexoquinases

Resumo

As hexoquinases são enzimas que catalisam a transferência de um grupo fosfato para uma hexose. Sua atividade está envolvida em passos importantes e freqüentemente iniciais do metabolismo de carboidratos em diversos organismos. Em Saccharomyces cerevisiae existem três enzimas com esta função hexoquinase 1 (HXK1) e 2 (HXK2) e a glicoquinase (GLK1). Estas enzimas possuem uma alta homologia de seqüência de aminoácidos entre elas. Apesar deste feito, estão envolvidas de forma diferencial no metabolismo da célula. Estudos baseados na seqüência primária e codificadora das hexoquinases tem levantado inúmeras hipóteses sobre os mecanismos de ação de estas enzimas na indução e manutenção da repressão por glicose. Estes estudos têm sido pouco conclusivos nas tentativas de responder essas questões. Assim, fica evidente a necessidade da estrutura terciária destas enzimas para o entendimento da suas funções. Acreditamos que a determinação da estrutura cristalográfica da HXK1, HXK2 e GLK1 de {\it Saccharomyces cerevisiae} fornecerá subsídios para tal investigação. Assim, o objetivo do presente projeto é clonar e purificar as hexoquinases e glicoquinase de {\it Saccharomyces cerevisiae}, em {\it E.coli}, para possibilitar a obtenção das suas estruturas cristalográficas. (AU)