Clonagem, estudo da localizacao subcelular e expressao da protease homologa a ftsh bacteriana em cana-de-acucar.

• Processo: 00/03348-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Márcio de Castro Silva Filho
• Beneficiário: Phellippe Arthur Santos Marbach
• Instituição Sede: Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALQ). Universidade de São Paulo (USP). Piracicaba , SP, Brasil
• Assunto(s): Cana-de-açúcar Mitocôndrias
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cana-De-Acucar | Cloroplasto | Mitocondria | Peptideo De Transito | Proteinas Aaa

Resumo

Em eucariotos, proteínas com homologia à protease bacteriana FtsH, estão envolvidas em importantes processos celulares como fosforilação oxidativa, fotossíntese, biogênese de plastídeos e degradação de fatores de transcrição. Em plantas, as proteases FtsH identificadas até o momento, estão localizadas em plastídeos, Porém, em levedura, estas proteases foram encontradas em mitocôndrias, sugerindo a existência destas proteases também em mitocôndrias de plantas, pois elas são altamente conservadas estrutural e funcionalmente. Recentemente, um cDNA que codifica para a protease FtsH foi parcialmente clonado pelo projeto SUCEST (FAPESP). Neste projeto propomos concluir a clonagem deste cDNA, e estudar a localização sub-celular e a expressão desta protease em cana-de-açúcar. Para estudar a localização sub-celular da FtsH, construções gênicas envolvendo o cDNA da FtsH e a proteína repórter GFP (Green Fluorescent Protein) serão introduzidas em protoplastos de tabaco via eletroporação. A localização subcelular de GFP será feita por meio de microscopia de fluorescência ou confocal. A expressão de FtsH será estudada por meio de Northern e Western Blot a partir do RN£ e proteína total, extraídos de tecidos de cana-de-açúcar em diferentes estágios de desenvolvimento, e, também sob estresse fotooxidativo. Estes estudos permitirão determinar a localização sub-celular, a especificidade do direcionamento da FtsH, bem como, sua expressão durante o desenvolvimento da cana-de-açúcar. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MARBACH, Phellippe Arthur Santos. História evolutiva das metaloproteases AAA. 2004. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (ESALA/BC) Piracicaba.