Expressao de endo-oligopeptidase "a" (eopa) em celulas de melanoma murino.

• Processo: 01/00163-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Luiz Rodolpho Raja Gabaglia Travassos
• Beneficiário: Thaysa Paschoalin
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Melanoma experimental
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biblioteca De Expressao | Construcoes Antisense | Endooligopeptidase | Melanoma Murino

Resumo

Com o, intuito de caracterizar a atividade de Endooligopeptidase A (EOPA) no melanoma murino, será verificada a expressão de mRNAs de EOPA em Northern blots com sonda obtida por PCR a partir de DNA total de linhagem B16F10 utilizando primers deduzidos da seqüência conhecida da enzima. Para verificação de expressão diferencial entre linhagens tumorigênica e normal, serão utilizadas as linhagens Melan A (melanócito imortalizado) e B16F10 (melanoma metastático) e dois clones pouco e muito invasivos derivados de B16F10. Pretende-se também finalizar o isolamento da EOPA do sobrenadante de células B16F10 e caracterizá-la e a importância desta enzima na evolução tumoral será acessada pelo bloqueio da expressão do gene de EOPA em B16F10 construindo vetores de expressão carregando segmentos do gene de EOPA no sentido inverso e transfectar ou transduzir a linhagem de melanoma que produz EOPA normalmente. A clonagem e seqüenciamento da EOPA de B16F10 após obtenção de uma biblioteca de cDNA é outra etapa do projeto a ser cumprida. (AU)