Identificacao, clonagem, expressao, purificacao e caracterizacao de lipoproteinas de leptospira interrogans.

• Processo: 03/04511-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2007
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Beneficiário: Fernanda de Oliveira Neves
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem Leptospira interrogans Purificação de proteínas Lipoproteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Leptospira Interrogans | Lipoproteinas | Purificacao De Proteinas

Resumo

A leptospirose é uma zoonose bastante disseminada causada pela bactéria patogênica do gênero Leptospira. Leptospiras são bactérias móveis, de formato helicoidal, sorologicamente classificadas em mais de 200 sorovares (Faine et al,, 1999). A distribuição geográfica da leptospirose é principalmente cosmopolita. Os roedores desempenham o papel de principais reservatórios da doença, pois albergam a leptospira nos rins, eliminando as vivas no meio ambiente e, contaminando água, solo e alimentos. Anualmente são relatados a Fundação Nacional de Saúde (FUNASA/MS) cerca de 5.000 casos. O estudo e caracterização de proteínas envolvidas na patogenicidade de L. interrogans, como as lipoproteínas (Haake et al., 2000), deverá fornecer dados importantes para o desenvolvimento futuro de uma vacina contra a leptospirose. Neste sentido, o projeto propõe identificar no genotna de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni (AEG/ONSA/FAPESP) e caracterizar 4 lipoproteínas. Estes genes serão amplificados a partir do DNA genômico de L. interrogans, e os insertos de DNA clonados em vetores apropriados utilizando E. coli como sistema hospedeiro de expressão. As proteínas recombinantes serão purificadas por cromatografia de afinidade a metal, analisadas quanto a sua estrutura pela técnica de dicroísmo circular e a imunogenicidade avaliada por Western blotting frente a soro de pacientes diagnosticados com leptospirose. (AU)