Estabelecimento de uma linhagem contendo um sistema induzível para a produção de vetor retroviral

• Processo: 03/13874-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Bryan Eric Strauss
• Beneficiário: Marcio Chaim Bajgelman
• Instituição Sede: Instituto do Coração Professor Euryclides de Jesus Zerbini (INCOR). Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Fatores de transcrição
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: P 53 | Pcl | Retrovirus | Sistema Induzivel

Resumo

O retrovírus é largamente utilizado como vetor de transferência gênica em ensaios de laboratório e protocolos clínicos. Um fator de extrema importância para o êxito na utilização de vetores retrovirais, consiste na produção de uma preparação de vírus de alto título, sob condições que protejam a integridade do vírus e das células produtoras. Genes citotóxicos e citostáticos codificados pelo vírus, tais como os supressores de tumor, são expressos nas células produtoras, podendo alterar seu crescimento, e comprometendo a produção viral. Estes efeitos deletérios ocasionam uma pressão seletiva que pode resultar em mutação ou deleção do gene codificado no vírus. Neste projeto, apresentamos um novo sistema induzível, o pPGL, baseado no sistema retroviral pCL. O sistema pPGL caracteriza-se por conter um elemento "PG", responsivo a p53, fundido ao LTR 5' de forma que a expressão dos genes virais nas células empacotadoras depende exclusivamente de p53 como fator de transcrição. Utilizamos conhecidos mutantes de p53, sensíveis a temperatura, que fornecidos em "trans" ativam a transcrição e expressão dos genes codificados no vírus. Na temperatura de 37ºC a proteína p53 mutante apresenta uma conformação transcricionalmente inativa. Entretanto, reduzindo-se a temperatura para 32ºC, a proteína p53 mutante altera sua conformação, e ficaria como um potente ativador transcricional, induzindo a produção de vírus. (AU)