Regulação da expressão e ativação do fator de transcrição C-JUN no miocardio de ratos submetido a sobrecarga pressora aguda

Autor(es)

Wilson Nadruz Junior

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2003-04-16

Membros da banca

Kleber Gomes Franchini; Francisco Rafael Martins Laurindo; Edecio Cunha Neto; Fernando Ferreira Costa; Otávio Rizzi Coelho

• Orientador: Kleber Gomes Franchini

Resumo

A expressão precoce dos genes de expressão imediata constitui uma característica fundamental do miocárdio durante o desenvolvimento de hipertrofia cardíaca. O gene de expressão imediata c-jun codifica um fator de transcrição que tem sido apontado como um importante regulador da resposta hipertrófica em miócitos cardíacos. Neste estudo, investigamos se a sobrecarga pressora aguda ou o tratamento com fenileftina estimulou a transcrição de c-jun em miócitos cardíacos e avaliamos a importância dos fatores de transcrição da família MEF2 neste processo. Experimentos de immunoblotting e imunohistoquímica demonstraram que MEF2 é bastante expresso no miocárdio de ratos e é localizado predominantemente no núcleo de miócitos cardíacos. Ensaios de "gel shift" de extratos nucleares revelaram um aumento significativo na afinidade de MEF2 pelo DNA após 1 e 2 horas de sobrecarga pressora. Demonstramos também que a sobrecarga pressora induziu a uma translocação nuclear progressiva e ativação de ERK5. Experimentos de co-imunoprecipitação e de atividade quinase in vitro indicaram que a atividade da ERK5 foi paralela a uma maior associação entre ERK5/MEF2 e a uma maior capacidade da ERK5 fosforilar MEF2 in vitro. Ensaios de gene repórter utilizando transfecção in vivo de plasmídeos contendo o promotor do c-jun demonstraram que a sobrecarga pressora induziu a um aumento consistente na transcrição de c-jun no miocárdio de ratos. Ao se utilizar plasmídeos contendo o promotor do c-jun mutado no sítio MEF2, observamos que não houve ativação da transcrição do c-jun em resposta à sobrecarga hemodinâmica. A mutação do sítio MEF2 também aboliu a ativação do promotor do c-jun em reposta ao tratamento com fenileftina em miócitos cardíacos ventriculares de ratos neonatos. Além disto, demonstramos que a transfecção dos miócitos ventriculares de ratos neonatos com um oligodeoxinucleotídeo ERK5-antisenso inibiu a ativação do promotor do c-jun em resposta à fenileftina. Estes achados identificam MEF2 como um regulador potencial da transcrição do c-jun e sugerem que ERK5 pode ser um importante mediador da ativação do promotor do c-jun e de MEF2 em resposta a estímulos hipertróficos em miócitos cardíacos. Além de estudar a regulação da expressão de c-Jun, também investigamos a sua ativação no miocárdio submetido à sobrecarga pressora aguda. Experimentos de immunoblotting utilizando subfrações celulares e estudos de imunohistoquímica demonstraram que a sobrecarga pressora induziu a um aumento concomitante na expressão de c-Jun e na fosforilação na serina-63 no núcleo de miócitos cardíacos. Observamos que a fosforilação de c-Jun foi paralela à fosforilação e translocação de JNKl para o núcleo de miócitos cardíacos. Além disto, ensaios de "gel shift" revelaram que a sobrecarga pressora induziu a um aumento na atividade de ligação de c-Jun com o DNA, que se correlacionou com o aumento de sua expressão. Estes dados demonstram que c-Jun é regulado por uma combinação de expressão e fosforilação e indicam que este sinergismo amplifica a ativação de c-Jun no miocárdio de ratos submetido à sobrecarga pressora (AU)

• Processo FAPESP: 99/10263-0 - Sinalizacao celular durante aumento de tensao no coracao: ativacao e regulacao de vias celulares de crescimento cardiaco.
• Beneficiário: Wilson Nadruz Junior
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado