Estudo da biologia da fimbria F42 produzida por Escherichia coli enterotoxigenica (ETEC)

Autor(es)

Claudio Roberto Nobrega Amorim

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2002-12-04

Membros da banca

Tomomasa Yano; Nilce Correa Meirelles; Lewis Joel Greene; Carlos Francisco Sampaio Bonafé; Gleize Villela Carbonel; Cleide Ferreira Catani

• Orientador: Tomomasa Yano; Maria Sumiko Arita

Resumo

Colibacilose enterotoxigênica ocorre em leitões recém-nascidos e porcos no pósdesmame. Um dos fatores de virulência de E. coli é a presença de antígenos de aderência, muitas vezes estruturas do tipo fimbria, que permite a ligação da bactéria às células do hospedeiro. Em 1986, Yano et ai. descreveram uma nova adesina, chamada de F42. Este trabalho tem por objetivo a caracterização bioquímica desta fimbria a nível molecular e comparar sua estrutura primária com a da fimbria F41, a fim de diferenciá-Ias. Assim, a fimbria F42 foi extraída e purificada através de cromatografia em coluna de gel filtração Sepharose CL 4B, equilibrada com tampão Tris-HCI O,O25M com NaCI O,15M, pH 7,4; apresentando massa molecular aparente de 16 kDa. Foi feita a análise da composição de aminoácidos da proteína, demonstrando a presença de aproximadamente 145 resíduos em uma única cadeia e mostrando diferenças com a fimbria F41. Fez-se, também, sua redução e carboximetilação, digestão com brometo de cianogênio, separação dos peptídeos através de cromatografia em coluna de fase reversa Cs e obtenção de peptídeos menores com a fimbria submetida à ação de tripsina tratada com N-tosil-Lfenilalanilclorometil cetona (TPCK). Os peptídeos resultantes da digestão foram separados através de cromatografia em coluna de fase reversa CIs. Foi feita nova digestão com CNBr e os peptídeos separados e purificados em coluna Superdex Peptide e foi feita a análise da composição de aminoácidos dos peptídeos. Foi feita a extração do DNA plasmidiano e PCR da amostra padrão. Foram feitas, também, digestões com Tripsina e Endoproteinase Asp-N, separação em cromatografia de fase reversa, análise da composição de aminoácidos de alguns peptídeos e sequenciamento de aminoácidos destes peptídeos e da porção Nterminal até o 32° resíduo, com o seguinte resultado: aswtegqpgdiiiggeitspsvkwlwktgegl Tentou-se, ainda, o sequenciamento da porção C-terminal com carboxipeptidase Y (AU)

• Processo FAPESP: 96/04985-4 - Estudo da Biologia Estrutural e Funcional da fímbria F42 produzida por Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) isolada de leitões com diarréia no Brasil
• Beneficiário: Claudio Roberto Nobrega Amorim
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado