Avaliação de riboswitch theo/metE para silenciamento gênico em Xanthomonas citri

Autor(es)

Danilo Bueno

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Rio Claro. 2018-08-30.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências. Rio Claro
• Data de defesa: 2018-07-27
• Orientador: Henrique Ferreira; Daniele Biscaro Pedrolli

Resumo

Estudos genéticos em qualquer organismo requerem ferramentas eficazes para se alterar a expressão gênica. Dentre estas, os riboswitches oferecem uma alternativa bastante atrativa para modulação da expressão de genes de interesse, onde é possível ligar e desligar tais genes sem a remoção dos mesmos dos genomas. Esta alternativa permite o estudo direto de um gene e a avaliação da sua falta (quando desligado ou “OFF”), bem como permite o reestabelecimento do selvagem sem a necessidade da complementação padrão (estado “ON”). Na busca por melhores condições de caracterização genética e do desenvolvimento de ferramentas dedicadas para estudos de genes essenciais ou de difícil caracterização em Xanthomonas citri, avaliamos o uso de um sistema de riboswitch theo/metE para o controle de expressão gênica nesta bactéria. A caracterização propriamente dita foi realizada alterando-se a expressão dos genes parB e α- amilase. O sucesso destas estratégias permitiu o silenciamento dos genes parB e e α-amilase, e ainda, foi possível observar que a inibição da transcrição do gene α-amilase refletiu em um decaimento da enzima α-amilase estando o riboswitch theo/metE na presença de seu metabólito alvo, a teofilina. Os resultados indicam que o riboswitch theo/metE utilizado neste estudo é uma ferramenta genética em potencial para silenciamento gênico em Xac. (AU)

• Processo FAPESP: 16/18519-0 - Avaliação de riboswitch theo/metE para silenciamento gênico em Xanthomonas citri
• Beneficiário: Danilo Bueno
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado