Efeito do processo inflamatório sobre as células mesenquimais indiferenciadas dos tecidos periodontais

Autor(es)

Mayra Laino Albiero

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Piracicaba, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
• Data de defesa: 2017-02-17

Membros da banca

Karina Gonzales Silverio; Bruna Rabelo Amorim; Bruno Bueno Silva; Thaisângela Rodrigues; Francisco Humberto Nociti Junior

• Orientador: Karina Gonzales Silverio

Resumo

O presente estudo avaliou o efeito do processo inflamatório sobre as propriedades das células mesenquimais indiferenciadas do ligamento periodontal (PDLSCs) e sobre a expressão dos marcadores mesenquimais nos tecidos periodontais. Inicialmente as PDLSCs purificadas para o marcador CD105 (hPDL-CD105+) foram expostas ao extrato proteico total da espécie bacteriana Porphyromonas gingivalis (PgPE), e avaliadas quanto ao metabolismo celular, atividade inflamatória, capacidade proliferativa e diferenciação osteogênica. Na sequência, foi analisada a alteração dos marcadores de perfil mesenquimal indiferenciado após a indução da doença periodontal in vivo, e confirmada in vitro. Para isso, hPDL-CD105+ foram expostas à diferentes concentrações de PgPE e avaliadas quanto ao metabolismo celular (ensaio de MTT), a fim de determinar a concentração de PgPE não-citotóxica. Apoptose (marcadores Annexin V e 7-AAD) foi avaliada pela técnica da citometria de fluxo. A atividade pró-inflamatória foi investigada por 1) expressão gênica de interleucina 1-beta (IL-1ß), interleucina 6 (IL-6) e (fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), 2) a presença da proteína IL-6 por imunofluorescência 3) qPCR array da via de sinalização IL6/STAT3. Para a avaliação da capacidade de diferenciação osteogênica, foi realizado o ensaio de formação de nódulos minerais, com coloração de vermelho de alizarina (AR) e expressão dos genes para Runt-related transcription factor 2 (RUNX2), fosfatase alcalina (ALP) e osteocalcina (OCN) por RT-qPCR. Doença periodontal experimental por ligadura foi induzida em ratos Wistar durante 7 dias, após este período o grupo somente com indução da doença sofreu eutanásia (n=8) e outro grupo recebeu raspagem da superfície radicular após a remoção da ligadura (n=8), e junto dos animais controle (n=8), sofreram a eutanásia aos 14 dias. Dos tecidos periodontais coletados de ratos foram avaliados a expressão dos marcadores relacionados ao fenótipo mesenquimal indiferenciado (STRO-1, CD105, CD166, CD146), por meio de ensaio de imunohistoquímica e expressão gênica por RT-qPCR. Os mesmos marcadores foram avaliados por citometria de fluxo nas hPDL-CD105+ expostas à PgPE. Os resultados mostraram que doses menores que 3 ?g/ml se mostraram não-citotóxicas, e não foram capazes de induzir apoptose celular. hPDL-CD105+ apresentaram aumento na expressão de citocinas pró-inflamatórias expostas à 2ug/ml de PgPE, e confirmados por um aumento na expressão de 28 genes inflamatórios envolvidos com a via IL6/STAT3. Adicionalmente, essas células apresentaram manutenção do potencial osteogênico com deposição significativa de nódulos minerais e expressão dos genes osteogênicos após exposição à PgPE. Nos tecidos periodontais, a doença periodontal inflamatória induziu um aumento na expressão gênica dos marcadores de superfície CD105 e CD166, e este resultado foi confirmado em nível proteico in situ. Nas hPDL-CD105+ estimuladas com PgPE, houve aumento do marcador de indiferenciação celular STRO-1. E este aumento está correlacionado positivamente ao aumento de expressão gênica da IL-6 nas hPDL-CD105+. Esses dados sugerem que houve uma clara modulação dos marcadores de superfície celulares relacionado ao fenótipo mesenquimal indiferenciado in vitro e in vivo, e que a presença da PgPE não impactou na viabilidade celular e a capacidade de diferenciação osteogênica das hPDL-CD105+, preservando suas propriedades biológicas (AU)

• Processo FAPESP: 14/01827-9 - Influência da exposição à Porphyromonas gingivalis sobre o fenótipo mesenquimal indiferenciado de células isoladas a partir do ligamento periodontal de humanos
• Beneficiário: Mayra Laino Albiero
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado