Caracterização conformacional e funcional de proteínas com domínio AAA através da investigação da ANKCLP humana e as Rvbs de Leishmania major e Saccharomyces cerevisiae

Autor(es)

Josielle Abrahão

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2018-01-26

Membros da banca

Carlos Henrique Inacio Ramos; Maria Celia Bertolini; Mário Tyago Murakami; André Ricardo de Lima Damásio; Juliana Ferreira de Oliveira

• Orientador: Carlos Henrique Inacio Ramos

Resumo

A família de proteínas AAA+ são enzimas ATPases associadas a inúmeras atividades celulares. Caracterizadas principalmente pela presença do domínio de ligação e hidrólise de nucleotídeos, conhecido como NBD (Nucleotide Binding Domain), as proteínas AAA+ possuem funções que compreendem desde a replicação do DNA até a degradação de proteínas. Dessa forma, esta tese descreve os resultados obtidos com algumas proteínas com domínio AAA+: ANKCLP humana e as Rvbs 1 e 2 de Leishmania major. A proteína ANKCLP humana possui um domínio de ligação e hidrólise de ATP, que é semelhante às chaperonas desagregases de outros organismos. Com isso, utilizando o modelo de estudo em leveduras, nossos resultados mostraram que a proteína ANKCLP humana não auxiliou na sobrevivência em células com o gene deletado da Hsp104, chaperona desagregase bem caracterizada em leveduras. Além disso, a ANKCLP não foi capaz de remodelar os agregados amilóides nas células de leveduras que continham fatores para formação de príons. Devido a semelhança com a ANKCLP, nos interessamos pelas características da proteína Hsp78, chaperona desagregase de mitocôndria de leveduras. Sendo assim, produzimos uma mini-revisão de literatura sobre esta proteína e uma visão crítica sobre a proteína ANKCLP ser uma chaperona desagregase em animais. Também neste trabalho foram estudadas as proteínas Rvbs que também possuem um domínio NBD e foram pela primeira vez descritas no organismo Leishmania major, causador da leishmaniose em mamíferos. De fato, estas helicases apesar de serem bem conhecidas em leveduras e humanos, são bem menos estudadas quando se trata de protozoários. Com isso, a Rvb1 e Rvb2 de L. major foram purificadas com sucesso, sendo que a LmRvb1 foi capaz de formar um pentâmero em solução, mas não possui atividade ATPásica in vitro. Já a LmRvb2 forma um grande oligômero e possui atividade ATPásica in vitro. A co-expressão destas proteínas demonstrou a presença de pelo menos um dímero em solução. Experimentos de estabilidade e fluorescência indicaram que estas proteínas interagem nestas condições e este dímero possui atividade ATPásica in vitro, assim como a LmRvb2. Por fim, com este trabalho foi possível compreender parte da função e conformação de algumas proteínas da família AAA+ e esperamos contribuir para o maior entendimento destas proteínas nos diferentes organismos (AU)

• Processo FAPESP: 13/10939-2 - Caracterização de genes humanos como potencial chaperona com função desagregase
• Beneficiário: Josielle Abrahão
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado