Estudo estrutural da interação da crotoxina e suas subunidades com membranas modelo

Autor(es)

Carlos Roberto Natal Junior

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Botucatu. 2020-03-03.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências. Botucatu
• Data de defesa: 2020-02-19
• Orientador: Marcos Roberto de Mattos Fontes; Roberto Morato Fernandez

Resumo

A crotoxina (CTX) é a mais abundante toxina presente no veneno da Crotalus durissus terrificus, representando cerca de 60% do peso seco do veneno bruto desta serpente. A CTX possui atividades neurotóxica, miotóxica e coagulante, sendo a principal responsável pelo elevado número de óbito em acidentes ofídicos causados por serpentes do gênero Crotalus. Além dessas características, foram descobertas ações da crotoxina com possíveis aplicações terapêuticas, por conta de seus efeitos anti-inflamatórios, analgésicos, imunomodulatórios e antitumorais. A CTX é um heterodímero composto por duas subunidades, uma ácida (CA) e outra básica (CB), sendo esta última uma fosfolipase A2 com atividade pré-sináptica de bloqueio da transmissão neuromuscular que provoca paralisias motora e respiratória nos animais. Embora as estruturas cristalográficas e por espalhamento de raios X a baixo ângulo (SAXS) de CTX e CB tenham sido resolvidas, pouco se sabe sobre a ação destas nas membranas celulares bem como da localização dos sítios de interação destas proteínas com as membranas alvo. Lipídios DMPC e DMPG foram utilizadas para se estudar a interação entre estas proteínas e membranas modelo. Técnicas de biofísica molecular, tais como espectroscopia de fluorescência estática e resolvida no tempo e espalhamento de raios X a baixo ângulo foram usadas para estudar o comportamento das proteínas na presença dos lipossomos. Os dados indicam ausência de interação entre CA e CTX sobre os lipídios isoteriônicos (DMPC), enquanto houve interação da CB com ambos sistemas lipídicos (DMPC e DMPG). Nas amostras de membranas modelo com carga negativa (DMPG), foi possível identificar interação envolvendo as proteínas CA e CTX com essas membranas, as quais não haviam interagido com as vesículas de DMPC, sendo que a proteína CA não provocou a lise da bicamada, enquanto a CTX desencadeou a lise dos lipídios. Além disso, os resultados sugerem que CA se dissocia de CB quando o heterodímero CTX se aproxima dos lipossomos. (AU)

• Processo FAPESP: 18/05090-1 - Estudo estrutural da interação da crotoxina e suas subunidades com membranas-modelo e inibidores
• Beneficiário: Carlos Roberto Natal Junior
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado