Desenvolvimento de micobacteriófago recombinante para detecção rápida de bacilos da tuberculose

Autor(es)

Joás Lucas da Silva

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ)
• Data de defesa: 2011-11-28

Membros da banca

Mario Hiroyuki Hirata; Elisabete Aparecida de Almeida; Rosilene Fressatti Cardoso; Sylvia Luisa Pincherle Cardoso Leão; Jorge Luiz Mello Sampaio

• Orientador: Mario Hiroyuki Hirata

Resumo

O diagnóstico da tuberculose por métodos tradicionais é lento e laborioso. Por outro lado, os testes moleculares são rápidos, mas com custo elevado para países em desenvolvimento. Este projeto teve o objetivo de inserir no micobacteriófago D29 o gene que codifica a proteína verde fluorescente (eGFP) e estudar o fago recombinante na detecção rápida de bacilos da tuberculose. Para tanto, foi inserido o cassete Hsp60- eGFP no genoma do fago D29 por recombinação. Micobacteriófagos recombinantes purificados foram utilizados para infectar M. smegmatis mc2 155 e M. tuberculosis H37Rv durante um período de 1- 6h nas temperaturas de 30°C, 37°C e 42°C. Bactérias fluorescentes foram observadas em um período de 2h, mas em número reduzido, indicando que o micobacteriófago lisou às células rapidamente, dificultando a expressão da eGFP e visualização em microscópio de fluorescência. A deleção do gene LysA, foi efetuada a fim de aumentar o período de latência do fago. Não foi possível a purificação de fagos recombinantes, devido à baixa quantidade de recombinantes nos halos de inibição. Será necessário a redução da atividade o gene LysA e, provavelmente, de outros genes associados a lise celular a fim de aumentar a concentração de eGFP no interior da célula. (AU)

• Processo FAPESP: 08/05082-7 - Construção e avaliação do micobacteriófago D29 com expressão da proteína verde fluorescente para detecção rápida de bacilos da tuberculose pulmonar
• Beneficiário: Joás Lucas da Silva
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado