Moléculas associadas aos lipid rafts modulam a transdução de sinal e a liberação de mediadores inflamatórios em mastócitos

Autor(es)

Edismauro Garcia Freitas Filho

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2019-10-30

Membros da banca

Maria Celia Jamur; Luis Lamberti Pinto da Silva

• Orientador: Maria Celia Jamur

Resumo

Os mastócitos (MCs) desempenham um papel essencial na imunidade inata, alergia e inflamação. A função dos MCs é diretamente relacionada à liberação de seus mediadores bioativos. Após ativação do receptor de alta afinidade para IgE (Fc?RI), os eventos iniciais da transdução de sinal inicial acontecem nos lipid rafts (LRs) da membrana plasmática. Com a intenção de melhor entender a importância dos LRs na função dos MCs, a atenção foi inicialmente voltada para o papel dos gangliosídeos derivados do GD1b, específicos de MCs e presentes nos LRs, na modulação da liberação de mediadores. O intercruzamento desses gangliosídeos através do mAbAA4 ativa os MCs sem induzir a desgranulação. Entretanto, o intercruzamento dos gangliosídeos resultou na liberação de mediadores lipídicos neoformados (prostaglandinas D2 e E2) e neossintetizados (interleucina-4, interleucina-6 e TNF-?). Essas respostas foram resultantes, respectivamente, da ativação parcial da via do ácido araquidônico e indução da fosforilação das MAP kinases e ativação de fatores de transcrição. Posteriormente foi de interesse investigar as proteínas que compõe os LRs de MCs RBL-2H3 através da espectrometria de massa qualitativa. 949 diferentes proteínas foram identificadas nos LRs. A análise de enriquecimento funcional demonstrou uma íntima associação dessas proteínas com compartimentos celulares com membranas e um envolvimento com processos biológicos de MCs, especialmente aqueles relacionados à secreção regulada, organização de complexos macromoleculares e transdução de sinal. Ainda, nesse proteoma de LRs, a RACK1 foi identificada pela primeira vez em MCs. RACK1 é uma proteína adaptadora multifuncional e um eixo central crítico para a sinalização intracelular e respostas imunorregulatórias. Portanto, foi importante caracterizar o papel funcional da RACK1 em MCs. O knockdown de RACK1 em MCs RBL-2H3 afetou a morfologia celular e resultou em um drástico rearranjo do citoesqueleto de actina com aumento da desgranulação basal e induzida por estímulo. A região cortical dos MCs knockdown para RACK1 apresentaram áreas livres de F-actina, o que pode facilitar a fusão de grânulos secretórios CD63+ com a membrana plasmática, explicando desta forma os níveis aumentados de desgranulação. Ainda, a RACK1 influencia positivamente a liberação de mediadores neossintetizados. Adicionalmente, a depleção de RACK1 demonstrou um impacto expressivo na mobilização de Ca2+. Concluindo, esse estudo demonstra que moléculas associadas aos LRs, os gangliosídeos derivados do GD1b específicos de MCs e a proteína adaptadora RACK1, modulam a transdução de sinal e a subsequente liberação de mediadores em MCs, fornecendo informações adicionais para a compreensão das funções de MCs. (AU)

• Processo FAPESP: 15/16673-0 - O papel funcional da proteína adaptadora RACK1 na ativação de mastócitos
• Beneficiário: Edismauro Garcia Freitas Filho
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado