Relação entre a função e expressão do VEGFR1 e a diferenciação vasculogênica de células-tronco da polpa dentária

Autor(es)

Mariel Tavares de Oliveira Prado Bergamo

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Bauru.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB/SDB)
• Data de defesa: 2020-03-13

Membros da banca

Thais Marchini de Oliveira Valarelli; Fernando Borba de Araujo; Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado; Jacques Eduardo Nor

• Orientador: Thais Marchini de Oliveira Valarelli

Resumo

O objetivo desse estudo foi avaliar o papel da expressão do Receptor 1 do Fator de Crescimento Endotelial Vascular (do inglês Vascular Endothelial Growth Factor 1 VEGFR1) na diferenciação das células-tronco da polpa dentária (do inglês Dental Pulp Stem Cell DPSC) e Células-tronco de dentes decíduos humanos esfoliados (do inglês Stem cell from Human Exfoliated Deciduous tooth SHED) em células endoteliais. Células foram separadas em células com alta (positivo/VEGFR1HIGH) e baixa (negativo/VEGFR1LOW) expressão do VEGFR-1 através de Citometria de Fluxo e cultivadas em alphaMEM suplementado com 20% de Soro Fetal Bovino (SFB) ou Meio de Crescimento Endotelial (EGM2-MV) suplementado com 50ng/mL de rhVEGF (controle ou meio de diferenciação) e 0 ou 25g/mL de Bevacizumab (Avastin® ou Bevacizumab). Os outros testes foram feitos in vitro para avaliar a proliferação celular e a diferenciação endotelial das células-tronco: SRB, ensaio de formação tubular, RT-PCR, Western Blot e Imunofluorescência. Para avaliar esse processo in vivo, matrizes receberam SHED com altos e baixos níveis de expressão de VEGFR1 e foram transplantadas para a região subcutânea do dorso de ratos imunocomprometidos e depois de 28 dias as amostras foram retiradas e ensaios de HE, imunohistoquímica e imunofluorescência foram realizados. A contagem de novos vasos sanguíneos foi feita no software ImageJ e as análises estatísticas foram feitas usando Teste T não pareado ou ANOVA a um critério seguido pelo Teste de Tukey e a significância estatística foi considerada p<0,05. Os resultados mostraram que SHED VEGFR1LOW teve maior taxa de proliferação no período de 72h independente do meio de cultura. A diferenciação de SHED/DPSC em células endoteliais in vitro foi confirmada através da expressão de marcadores de células endoteliais e formação de brotamentos por essas mesmas células. SHED VEGFR1HIGH apresentou maior formação de brotamentos in vitro e maior quantidade de microvasos sanguíneos in vivo, mostrando o importante papel deste receptor na diferenciação vasculogênica da SHED e DPSC. (AU)

• Processo FAPESP: 17/11396-3 - Expressão gênica de proteínas por células-tronco derivadas da polpa de dentes decíduos após o uso do Laser de Baixa Intensidade
• Beneficiário: Mariel Tavares de Oliveira Prado Bergamo
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado