Regulação da expressão do promotor do gene do receptor de glicocorticoide em clones de celulas transfectadas com o photo-oncogene c-jun

Autor(es)

Ana Lucia Beirão Cabral

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 1996-09-26

Membros da banca

Vilma Regina Martins

• Orientador: Vilma Regina Martins

Resumo

Os hormônios glicocorticóides, com conhecida ação antiinflamatória e antitumoral, agem apenas em células com receptores citoplasmáticos específicos ( GR ), portanto se toma extremamente importante conhecer os mecanismos envolvidos na regulação da expressão destes receptores para avaliar a resposta ao hormônio. Trabalhos preliminares realizados pelo nosso grupo em células transformadas pelo oncogene EJ-ras apontam para uma regulação negativa de GR a nível transcricional de GR decorrente desta transformação. Entretanto, a oncoproteína não pode regular diretamente a transcrição gênica já que está ancorada à membrana celular. O promotor do gene de GR possui um elemento similar a AP-I e isto, aliado ao fato de que Ras participa diretamente do processo de fosforilação de c-Jun, sugere que o produto deste proto-oncogene pode ser um dos alvos nucleares de Ras para a regulação do promotor do gene de GR. O presente trabalho teve como objetivo determinar o papel de c-Jun na regulação do promotor do gene de GR e analisar a capacidade de ligação da proteína c-Jun ao elemento AP-l presente neste promotor. Para tanto foram gerados clones de células NIH3 T3 transfectadas com c-jun e estes foram analisados quant.o à expressão do RNA mensageiro ( RNAm ) de c-jun e GR, bem como as respectivas proteínas por eles codificadas. A análise dos dados da expressão de c-Jun e GR, a nível de RNAs mensageiros e de proteínas, mostram que nos clones onde há aumento do RNAm de c-jun há decréscimo do RNAm de GR, sugerindo que a presença de c-Jun possa atenuar a transcrição do gene de GR. Entretanto nem sempre se encontrou uma correlação inversamente proporcional entre o RNAm de c-jun e de GR. Os valores obtidos após a determinação da concentração das proteínas c-Jun e GR evidenciam um padrão de regulação gênica muito mais complexo. Novamente ficou constatado que não havia correspondência entre os valores dos RNAs mensageiros e proteínas c-Jun e GR. Foram realizados ainda ensaios de retardamento de mobilidade eletroforética, utilizando a seqüência AP-l do promotor do gene de GR e extratos nucleares dos clones NIH3 T3 c-jun. Estes experimentos comprovam uma regulação mais complexa, pois mostram que a proteína c-Jun contida nos extratos nucleares não é capaz de se ligar à seqüência similar à AP-l contida no promotor do gene de GR. Concluindo que. a regulação do gene de GR por c-Jun não é dada diretamente por sua interação com o elemento específico contido no promotor deste gene (AU)

• Processo FAPESP: 94/06248-1 - Regulacao da expressao do gene do receptor de glicocorticode em clones de celulas transfectadas com proto-oncogene c-jun.
• Beneficiário: Ana Lucia Beirão Cabral
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado