ELISA plasmônica na detecção de anticorpos IgG anti-leishmania sp.

Autor(es)

Marilene Oliveira dos Santos Maciel

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Araçatuba. 2019-06-12.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Medicina Veterinária. Araçatuba
• Data de defesa: 2019-06-10
• Orientador: Valéria Marçal Felix Lima

Resumo

O cão tem sido alvo do controle da Leishmaniose Visceral (LV), pois são reservatórios potenciais de Leishmania infantum e desempenham um papel fundamental na cadeia epidemiológica da doença no homem. Portanto, o diagnóstico da leishmaniose canina (Lcan) no Brasil tem sido um desafio para os órgãos de controle de endemias, uma vez que apresentam limitações quanto à sensibilidade e especificidade em áreas endêmicas. Nesta perspectiva a presente pesquisa objetivou desenvolver e validar um ELISA plasmônica indireto rK28 (pELISA) para o diagnóstica da Lcan. Para o desenvolvimento do pELISA, foram realizados diferentes ensaios de otimização, determinação das concentrações ideais de peróxido de hidrogênio, íons ouro, anticorpo IgG anti-dog biotinilado e também do soro. Para a validação do ensaio, 170 amostras de soro de cães de área endêmica para Lcan e 26 amostras de cães saudáveis de área não endêmica para a doença foram testadas pelo pELISA e comparadas com ELISA indireto rk28 e com o teste imunocromatográfico (Dual Path Platform, TR_DPP®) usando como teste padrão-ouro o qPCR em amostras de sangue e/ou swab de subconjuntival. O ensaio foi padronizado com as concentrações de 250 μM de peróxido de hidrogênio, 0,30 mM de íons ouro e a melhor diluição do conjugado de estreptavidina-catalase foi de 1/50. O TR_DPP®, ELISA indireto rK28 e pELISA apresentaram sensibilidade de 79,0%, 89,5% e 94,7% e especificidade de 90,1%, 91,4% e 100,0%, respectivamente. Os maiores valores preditivos positivos (100,0%), negativos (99,3%) e de precisão (99,4%) foram observados no pELISA. O coeficiente Kappa entre o pELISA e a qPCR mostrou excelente concordância (0,970), diferentemente do ELISA indireto rK28 e do TR_DPP®, que mostraram um boa concordância (0,645 e 0,551, respectivamente). O resultados revelaram que o pELISA melhorou a sensibilidade e apresentou alta especificidade em relação ao método oficial recomendado pelo Ministério da Saúde no Brasil e pode aumentar a praticidade do diagnóstico em países com recursos limitados, pois não requer instrumentos sofisticados para leitura, sugerindo que este método pode ser usado como uma ferramenta adicional para o diagnóstico de Lcan nessas áreas. (AU)

• Processo FAPESP: 17/11016-6 - ELISA plasmônica na detecção ultra-sensível de anticorpos IgG anti-Leishmania sp
• Beneficiário: Marilene Oliveira dos Santos Maciel
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado