Estudo da expressão do Gene ABR em leucemia mieloide cronica (LMC) utilizando real-time RT-PCR (qPCR),

Autor(es)

Carolina Yaeko Namasu

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2006-07-17

Membros da banca

Fernando Lopes Alberto; Carmen Silvia Passos Lima; Maria Ines de Moura Campos Pardini

• Orientador: Fernando Lopes Alberto; Fernando Ferreira Costa

Resumo

Leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa crônica resultante de alteração citogenética t(9;22) (q34; q11) que acarreta atividade constitutiva de tirosino-quinase por meio da proteína quimérica BCR-ABL. Esta alteração ocorre nas células precursoras hematopoéticas e pode ser detectada em todas as células descendentes. O mesilato de imatinibe (Glivec®) é um inibidor do receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF-R), proteína quinase do BCR-ABL, administrado com sucesso a pacientes portadores de LMC. Porém, algumas formas de resistência ao tratamento têm sido apontadas, e as mais conhecidas envolvem o surgimento de mutações no domínio com atividade de quinase da proteína BCR-ABL. Entretanto, parece claro que o surgimento mutações adquiridas que acarretem ganho de função não é capaz de explicar todos os casos de resistência e que outros sistemas gênicos podem estar envolvidos neste fenótipo adverso. O gene ABR possui grande homologia com o gene BCR e aparentemente apresenta funções características e outras compartilhadas com esse último. Neste trabalho, avaliamos a expressão do gene ABR em amostras de medula óssea e sangue periférico de pacientes portadores de LMC em fase crônica ao diagnóstico e em pacientes que receberam transplante alogênico de medula óssea, utilizando a técnica de RT-PCR quantitativo em tempo real (qPCR). ABR apresentou notável aumento de expressão relativa a indivíduos normais (mediana = 5,483) em 8 de 9 pacientes de LMC avaliados em fase crônica ao diagnóstico, de acordo com o teste Wilcoxon signed rank (p-valor = 0,01563), o que se correlaciona com resultados anteriores de nosso grupo (Alberto e Costa, 2003). Diminuição nos níveis de expressão do ABR parece correlacionar-se com o status de remissão dos pacientes analisados, conforme avaliado pela expressão do transcrito BCR-ABL por PCR quantitativo em tempo real, o que pode ser confirmado nos pacientes em remissão molecular ao transplante alogênico de medula óssea. Estes dados poderiam sugerir uma possível importância do gene ABR durante a evolução da doença. A expressão do gene ABR foi normalizada com os dois genes controle com melhor desempenho, ACTB e GAPD, utilizando-se o algoritmo geNorm. As eficiências de amplificação das reações de qPCR foram avaliadas e resultaram em valores semelhantes e próximos a 100%. Sensibilidade analítica da reação de qPCR resultou em uma detecção mínima de 1, 12, 10 e 9 moléculas, respectivamente, para ABR, BCR, ACTB e GAPD. O método mostrou-se útil para medida precisa dos níveis de expressão gênica, e adequada para estudar a relevância de sinais biológicos de pequena intensidade (AU)

• Processo FAPESP: 03/10546-9 - Estudo da expressao do gene abr por real-time rt-pcr em leucemia mieloide cronica (lmc).
• Beneficiário: Carolina Yaeko Namasu
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado